SDF-1α通過(guò)激活LFA-1促進(jìn)單核細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞黏附.pdf

1、趨化因子SDF-1α及其特異受體CXCR4在維持胚胎發(fā)育、造血干細(xì)胞的遷移和歸巢、腫瘤細(xì)胞遷移、免疫反應(yīng)、炎癥反應(yīng)和介導(dǎo)人類(lèi)免疫缺陷病毒(HIV)感染等方面發(fā)揮重要作用。最近研究發(fā)現(xiàn)SDF-1α又在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中高表達(dá)，SDF-1α/CXCR4與動(dòng)脈粥樣硬化的關(guān)系已經(jīng)引起重視。 在前期的工作已發(fā)現(xiàn)SDF-1α具有促黏附作用，可以促進(jìn)THP-1/內(nèi)皮細(xì)胞、THP-1/平滑肌細(xì)胞的黏附，但具體機(jī)制不清楚。本研究旨在探討SDF-1

2、α促黏附作用的機(jī)制。 目的：本試驗(yàn)擬從以下三個(gè)方面探討其作用機(jī)制：①ox-LDL對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞SDF-1α和ICAM-1表達(dá)的影響；②SDF-1α對(duì)THP-1單核細(xì)胞上LFA-1表達(dá)及其在細(xì)胞膜上分布的影響；③SDF-1α、SDF-1α抗體和LFA-1抗體干預(yù)對(duì)THP-1與內(nèi)皮細(xì)胞黏附的影響。 方法：RT-PCR檢測(cè)SDF-1α、ICAM-1和LFA-1 mRNA的表達(dá)，Western blot檢測(cè)其蛋白表達(dá)變化，觀(guān)察ox-

3、LDL對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞SDF-1α表達(dá)的劑量和時(shí)間效應(yīng)及對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1表達(dá)的劑量效應(yīng)，觀(guān)察SDF-1α對(duì)THP-1單核細(xì)胞LFA-1表達(dá)的影響。免疫熒光觀(guān)察SDF-1α對(duì)THP-1單核細(xì)胞LFA-1在細(xì)胞膜上分布的改變。用靜態(tài)黏附實(shí)驗(yàn)來(lái)研究THP-1與內(nèi)皮細(xì)胞的黏附，用25μg/ml ox-LDL處理內(nèi)皮細(xì)胞48h后，將THP-1單核細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞共孵育后洗脫檢測(cè)黏附作用，并加用SDF-1α抗體或LFA-1抗體阻斷；用不同濃度SDF-

4、1α處理過(guò)的內(nèi)皮細(xì)胞與THP-1共孵育后洗脫檢測(cè)黏附作用，并加用LFA-1抗體阻斷。 結(jié)果：SDF-1α在靜息狀態(tài)下的血管內(nèi)皮細(xì)胞上幾乎不表達(dá)，ox-LDL對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞SDF-1α的表達(dá)有明顯促進(jìn)作用，ox-LDL在0-125μg/ml的濃度范圍內(nèi)，隨ox-LDL濃度增加，SDF-1α的表達(dá)亦逐漸上調(diào)，當(dāng)ox-LDL濃度為25μg/ml時(shí)，SDF-1α表達(dá)達(dá)峰值，當(dāng)濃度為125μg/ml時(shí)，內(nèi)皮細(xì)胞上SDF-1α表達(dá)下降。用25μ

5、g/ml的ox-LDL與內(nèi)皮細(xì)胞孵育0-48h，隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)，SDF-1α表達(dá)逐漸的增加，在48h時(shí)，SDF-1α的表達(dá)為最大值。ICAM-1在內(nèi)皮細(xì)胞上有基礎(chǔ)水平表達(dá)，在0-125μg/ml ox-LDL，ICAM-1的表達(dá)與SDF-1α的表達(dá)類(lèi)似。LFA-1在THP-1細(xì)胞上有基礎(chǔ)水平的表達(dá)，100ng/ml SDF-1α對(duì)THP-1 的LFA-1表達(dá)無(wú)影響，但可以激活它，使其在細(xì)胞膜上重新分布、簇集。Ox-LDL呈濃度依賴(lài)性