6-OHDA誘導(dǎo)大鼠帕金森病模型的差異蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、帕金森?。≒arkinson’ Disease，PD）是一種慢性進(jìn)行性神經(jīng)變性疾病，主要的病理改變?yōu)楹谫|(zhì)和紋狀體中多巴胺能神經(jīng)元和多巴胺能神經(jīng)纖維的變性和脫失,殘存的多巴胺能神經(jīng)元內(nèi)出現(xiàn)特征性的嗜酸性包涵體(Lewy 小體)。紋狀體多巴胺遞質(zhì)的嚴(yán)重減少引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)及自主神經(jīng)系統(tǒng)的功能障礙。PD 發(fā)病情況復(fù)雜，是眾多因素參與的過(guò)程，諸多發(fā)揮作用的蛋白質(zhì)共同影響和決定著多巴胺能神經(jīng)元的最終結(jié)局。以動(dòng)物模型為基礎(chǔ)的PD 研究發(fā)展迅速。與實(shí)

2、驗(yàn)?zāi)Ｐ拖嗖⑿?研究PD 的實(shí)驗(yàn)手段也在不斷地推陳出新，表現(xiàn)為在分子、細(xì)胞、整體不同水平上,以機(jī)能與形態(tài)研究相結(jié)合方式,融合多學(xué)科方法和技術(shù)的研究趨勢(shì)。蛋白質(zhì)組研究擯棄了傳統(tǒng)的對(duì)單一或少數(shù)蛋白質(zhì)的分割式研究模式，使得在整體水平上研究細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)組成及其活動(dòng)規(guī)律成為可能。蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)在神經(jīng)變性疾病研究中已開(kāi)始確立了非常重要的地位。從結(jié)構(gòu)蛋白的識(shí)別到功能蛋白的鑒定，神經(jīng)變性疾病的蛋白質(zhì)組學(xué)研究正在不斷取得進(jìn)展。PD 研究雖然已經(jīng)取得巨大進(jìn)展

3、,但PD 確切的發(fā)病機(jī)制、早期診斷、有效治療等仍是亟待解決的問(wèn)題。隨著蛋白質(zhì)組技術(shù)的不斷發(fā)展,蛋白質(zhì)組學(xué)特別是比較蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)的介入，將在上述領(lǐng)域帶來(lái)新的希望。通過(guò)蛋白質(zhì)組學(xué)的研究發(fā)現(xiàn)與PD 密切相關(guān)的疾病特異性蛋白,有可能促進(jìn)PD 的早期診斷和提供PD 的治療靶點(diǎn)。為深入探索PD 的發(fā)病機(jī)制，本研究建立了符合國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的6-OHDA 誘導(dǎo)的Wistar 大鼠PD 模型。以此為基礎(chǔ)，首次采用熒光差異凝膠電泳（DIGE）和質(zhì)譜（MS）技術(shù)

4、分析并鑒定了大鼠PD 模型紋狀體區(qū)域的蛋白質(zhì)表達(dá)水平的變化。在6-OHDA 大鼠PD 模型紋狀體中，發(fā)現(xiàn)6 個(gè)蛋白的表達(dá)呈顯著差異。 4 個(gè)上調(diào)蛋白質(zhì)分別為泛素羧基末端水解酶L1（UCH-L1）、PeroxiredoxinⅡ（PrxⅡ）、谷氨酰胺合成酶（GS）和熱休克蛋白90?（HSP90?）；2 個(gè)下調(diào)的蛋白質(zhì)分別為線粒體順烏頭酸酶（ACO2）和甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH)。 本研究首次發(fā)現(xiàn)在6-OHDA 大鼠

5、PD 模型紋狀體中UCH-L1 表達(dá)水平顯著增高，這與在mRNA 水平的研究結(jié)果相符。UCH-L1 表達(dá)水平顯著增高，可能利于多巴胺能神經(jīng)元清除異常蛋白質(zhì)、延緩異常蛋白聚集過(guò)程、抑制Lewy 小體形成。UCH-L1 表達(dá)上調(diào)顯示實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)的自我神經(jīng)保護(hù)機(jī)制。 本研究首次發(fā)現(xiàn)在6-OHDA 大鼠PD 模型紋狀體中PrxⅡ表達(dá)水平顯著升高，這提示實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)針對(duì)氧化應(yīng)激的神經(jīng)保護(hù)機(jī)制。PrxⅡ可能成為針對(duì)氧化應(yīng)激進(jìn)行可控性調(diào)節(jié)的切

6、入點(diǎn)。 本研究首次發(fā)現(xiàn)在6-OHDA 大鼠PD 模型紋狀體中GS 表達(dá)水平顯著升高，這可能是6-OHDA 毒性損傷后腦內(nèi)代償性反應(yīng)的重要標(biāo)志。對(duì)GS 的活性進(jìn)行調(diào)節(jié)，可能保持Glu-Gln 循環(huán)的動(dòng)態(tài)平衡，可能成為防止Glu 興奮毒性的潛在治療靶點(diǎn)。 本研究首次發(fā)現(xiàn)在6-OHDA 大鼠PD 模型紋狀體中HSP90?水平升高，這與MPTP 小鼠PD 模型的研究結(jié)果相一致。HSP90?表達(dá)水平顯著升高，可能既是應(yīng)激損害的反映

7、，也是神經(jīng)元抗凋亡機(jī)制的體現(xiàn)。HSP90?可能是一個(gè)阻斷凋亡進(jìn)程的潛在靶點(diǎn)。 本研究首次發(fā)現(xiàn)6-OHDA 大鼠PD 模型紋狀體中ACO2 表達(dá)顯著下調(diào)，這與對(duì)MPTP 小鼠PD 模型及人類(lèi)PD 的研究結(jié)果相一致。ACO2 表達(dá)水平顯著下調(diào)是線粒體功能障礙標(biāo)志的重要標(biāo)志，提示線粒體功能障礙在PD 發(fā)病中扮演重要的角色。阻止ACO2 的下調(diào)，從而減少自由基產(chǎn)生，阻斷多巴胺能神經(jīng)元的變性過(guò)程，這可能是PD 治療學(xué)研究的另一個(gè)方向。