消瘀化痰飲對非酒精性脂肪肝大鼠胰島素抵抗的影響.pdf

1、目的：消瘀化痰飲(由澤瀉、制半夏、丹參、郁金、柴胡、決明子、生黃芪、炒白術(shù)等組成)具有消痰化瘀、健脾疏肝功效，為導師臨床觀察篩選的效方，對非酒精性脂肪肝(NAFLD)具有較好的治療效果，為了進一步探討其作用機理，參照相關(guān)文獻用高脂飼料喂飼大鼠復制NAFLD大鼠模型，同時施加藥物干預，通過觀察其對膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游離脂肪酸(FFA)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)的影響，探討了本方在調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝

2、和保護肝功能方面的作用機制；通過觀察其對胰島素(INS)、血糖(FBG)和肝組織絲氨酸/蘇氨酸激酶(Akt)表達的影響，探討了其改善胰島素抵抗(IR)的作用機制。并運用光鏡和電鏡觀察了本方對肝組織形態(tài)學的影響。 方法 第一部分消瘀化痰飲對NAFLD大鼠脂質(zhì)代謝和肝組織形態(tài)學的影響選用SD大鼠50只，體重160～180g，雄性。大鼠自由飲水進食，飼養(yǎng)于18℃～22℃明暗各12小時的清潔級動物實驗室內(nèi)。正常喂養(yǎng)1周后，隨機分

3、為5組：正常對照組(簡稱正常組)、模型對照組(簡稱模型組)、消瘀化痰飲高劑量組(簡稱高劑量組)、消瘀化痰飲低劑量組(簡稱低劑量組)、陽性藥(東寶肝泰)對照組(簡稱對照組)。各組1次/d灌胃，每次用藥體積均按1ml/100g計算。除正常組喂飼普通飼料外，其余各組均喂飼高脂飼料。同時，各治療組灌服相應(yīng)藥物，正常組與模型組灌服等量生理鹽水，每天上午灌藥1次，實驗9周末，確定脂肪肝形成后，于最后1次給藥后禁食12h，麻醉狀態(tài)下股動脈取血，將血樣

4、低溫離心，分離血清，密封，-20℃冷貯，以備檢測血清TG、TC、FFA的含量和AST、ALT的活性。然后迅速打開腹腔，剖取肝臟，在肝臟最大葉距邊緣0.5cm處取0.1×0.1×0.1 cm3大小肝組織浸泡于4％戊二醛中固定，以備進行電鏡觀察。另取相同部位0.5×0.5×0.5cm3大小肝組織置于4％多聚甲醛液中固定，石蠟包埋，切片，HE染色，以備光鏡觀察。最后將肝臟最大葉剩余肝組織冷凍，以備制作肝勻漿，檢測肝組織TG、TC的含量。第二部

5、分消瘀化痰飲對NAFLD大鼠胰島素抵抗的影響實驗動物分組、用藥情況同前。實驗9周末，確定脂肪肝形成后，于最后1次給藥禁食12h，麻醉狀態(tài)下股動脈取血，將血樣低溫離心，分離血清，檢測血清FBG、INS的含量或活性，并計算胰島素抵抗指數(shù)和胰島素敏感指數(shù)。然后迅速打開腹腔，剖取肝臟，在肝臟最大葉距邊緣0.5cm處取0.5×0.5×0.5cm3大小肝組織置于4％多聚甲醛液中固定，石蠟包埋，切片，運用免疫組織化學染色方法檢測Akt在肝組織的表達情

6、況。 結(jié)果： 第一部分消瘀化痰飲對NAFLD大鼠脂質(zhì)代謝和肝組織形態(tài)學的影響1各組大鼠血清TG、TC、FFA的含量變化模型組大鼠血清TG、TC、FFA的含量(1.17±0.096、3.27±0.18、480.475±18.94)明顯高于正常組(0.56±0.084、1.45±0.20、225.71±15.98)(P<0.01)，顯示NAFLD大鼠存在著明顯的脂質(zhì)代謝紊亂。經(jīng)用藥干預，各用藥組均能顯著降低模型大鼠血清TG、

7、TC、FFA的含量，與模型組比較均具有顯著性差異(P<0.01)。其中高劑量組大鼠血清TG、TC、FFA的含量(0.52±0.065、1.44±0.11、221.43±15.32)和低劑量組的含量(0.57±0.059、1.56±0.13、241.42±16.96)較對照組的含量(0.76±0.070、2.06±0.28、331.90±16.32)均明顯降低(P<0.01)。而高、低劑量組之間經(jīng)統(tǒng)計學處理無明顯差異(P>0.05)。

8、 2各組大鼠血清AST、ALT的活性變化模型組大鼠血清AST、ALT的活性(32.37±2.45、15.84±1.01)明顯高于正常組的活性(26.59±2.33、10.89±0.86)(P<0.01)。經(jīng)用藥干預，各用藥組大鼠血清AST、ALT的活性均有明顯的下降，與模型組比較，差異有顯著性(P<0.01)。且低劑量組AST的活性(19.45±1.90)較對照組的活性(23.19±1.78)低(P<0.05)；高劑量組ALT的活性

9、(4.16±0.89)優(yōu)于對照組的活性(7.32±0.45)(P<0.05)，而高、低劑量組之間AST、ALT的活性經(jīng)統(tǒng)計學處理無明顯差異(P>0.05)。 3各組大鼠肝組織中TG、TC的含量變化模型組大鼠肝臟TG、TC的含量(0.82±0.08、0.44±0.07)明顯高于正常組的含量(0.45±0.05、0.27±0.04)(P<0.01)。經(jīng)用藥干預，各用藥組均能顯著降低模型大鼠肝組織TG、TC的含量(P<0.01)。且高

10、劑量組TC的含量(0.27±0.04)低于對照組的含量(0.34±0.05)(P<0.05)，而高、低劑量組TC的含量經(jīng)統(tǒng)計學處理無明顯差異(P>0.05)；各用藥組TG的含量經(jīng)統(tǒng)計學處理無明顯差異(P>0.05)。 4各組大鼠肝臟組織形態(tài)學的變化光鏡可見：正常組大鼠肝組織結(jié)構(gòu)完整、清晰，肝小葉結(jié)構(gòu)正常，中央靜脈大而壁薄，肝細胞排列成肝索，在中央靜脈周圍呈放射狀分布，細胞呈多邊形。模型組大鼠肝細胞中度細胞水腫，少量的肝細胞壞死，多數(shù)肝細

11、胞內(nèi)可見大小不等、數(shù)量不一的脂滴空泡(脂肪變性)，重度變性者，脂滴空泡融合，呈現(xiàn)中至重度脂肪變性，但未見明顯的纖維化改變。各治療組動物肝小葉和肝血竇結(jié)構(gòu)清晰，消高組、消低組肝細胞內(nèi)脂滴空泡基本消失，對照組中少量的肝細胞內(nèi)仍有脂滴空泡，并有輕度的細胞水腫。 透射電鏡可見：正常組大鼠肝臟細胞質(zhì)中線粒體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等基本正常；模型組細胞質(zhì)內(nèi)充滿了大、小不同的脂滴，線粒體全部脊融合、消失；粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)有輕度脫顆?，F(xiàn)象。對照組細胞胞漿內(nèi)可見

12、大、小不等脂滴，線粒體腫脹、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)有部分斷裂現(xiàn)象。高、低劑量組上述情況明顯改善，肝細胞胞漿有少量脂滴，線粒體形態(tài)基本正常，脊數(shù)目明顯增多，僅部分可見輕度腫脹變形，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)基本正常。 第二部分消瘀化痰飲對NAFLD大鼠胰島素抵抗的影響1各組大鼠血清FBG、INS含量的變化模型組大鼠血清FBG、INS的含量(16.58±2.16、24.81±3.18)明顯高于正常組(9.51±1.08、9.57±1.74)(P<0.01)；用藥后各治

13、療組均能顯著降低模型大鼠的FBG和INS含量(P<0.01或P<0.05)。高劑量組FBG、INS的含量(9.55±1.81、8.21±1.94)顯著低于對照組(11.98±2.03、11.81±2.03)(P<0.01)；低劑量組FBG的含量(9.59±1.83)顯著低于對照組(P<0.01)；而高劑量組與低劑量組大鼠血清FBG、INS的含量無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。 2各組大鼠HOMA-IR、ISI的變化模型組大鼠HOMA-IR

14、(18.35±3.42)明顯升高、ISI(-2.61±0.08)明顯低于正常組(P<0.01)。經(jīng)過治療，高劑量組大鼠HOMA-IR(3.52±1.08)明顯降低、INS(-1.88±0.15)明顯升高(P<0.01)；且高劑量組與低劑量組(5.09±1.17)大鼠HOMA-IR低于對照組(6.49±1.29)(P<0.01)、高劑量組大鼠ISI高于對照組(-2.14±0.14)(P<0.01)。而高劑量組與低劑量組比較無統(tǒng)計學意義(P

15、>0.05)。 3各組大鼠肝組織Akt表達的變化Akt在正常肝細胞中表達明顯，呈棕黃色胞漿型分布，造模以后大鼠肝組織Akt表達明顯減弱、陽染細胞數(shù)目減少。用藥后，各治療組大鼠肝組織Akt表達較模型組明顯增強，陽染細胞數(shù)目明顯增加。 結(jié)論 1消瘀化痰飲能顯著降低NAFLD大鼠血清和肝組織內(nèi)異常升高的TC、TG、FFA的含量，抑制血清內(nèi)ALT和AST活性的異常升高，呈現(xiàn)出良好的的調(diào)脂護肝作用。 2消瘀化痰飲可