益氣活血、化瘀通絡(luò)之中藥對腎間質(zhì)纖維化的作用研究.pdf

1、目的：腎間質(zhì)纖維化(TIF)是各種原因所致腎臟疾病進(jìn)展至終末期腎功能衰竭的共同病理特征。大量臨床病理資料表明，各種原因引起的慢性腎功能損傷與腎小管間質(zhì)纖維化病變的嚴(yán)重程度較與腎小球病變的關(guān)系更為密切。而細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)的合成和降解失衡，造成其大量積聚是引起腎間質(zhì)纖維化的主要原因[2]。臨床上應(yīng)用血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑(ACEI)、血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑(ARB)等藥物，通過調(diào)節(jié)ECM合成、降解來防治TIF，但循證醫(yī)學(xué)已證明，上述藥物

2、在血肌酐高于一定值時，對腎臟不但無保護(hù)作用，還能加重其損害，且藥價偏高，因而使其應(yīng)用受限。因此尋找具有多途徑多靶點治療作用、安全低成本的藥物對腎間質(zhì)纖維化的防治有重要的意義。本實驗應(yīng)用導(dǎo)師經(jīng)驗方龍甲參芪湯對單側(cè)輸尿管結(jié)扎(UUO)誘導(dǎo)的腎間質(zhì)纖維化大鼠模型進(jìn)行干預(yù)性治療，并以ARB類藥物纈沙坦(Valsartna)為對照，旨在通過觀察龍甲參芪湯對實驗動物梗阻側(cè)腎臟組織形態(tài)學(xué)及轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)、Ⅲ型膠原(ColⅢ)及其受體

3、的影響，探討中藥復(fù)方-龍甲參芪湯對腎間質(zhì)纖維化的拮抗作用及可能的作用機(jī)制。 方法：本實驗研究選用雄性SD大鼠40只，適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，分別置代謝籠里取尿，測定尿蛋白及尿紅細(xì)胞全部陰性，隨機(jī)分為4組，假手術(shù)組(SHAM group)、模型組(UUO group)、纈沙坦組(UUOV group)、龍甲參芪湯(UUOLgroup)組，每組10只，除假手術(shù)組外，各組動物均結(jié)扎左側(cè)輸尿管并在術(shù)前一天灌胃給藥，假手術(shù)組與模型組分別灌入等量

4、的生理鹽水，于結(jié)扎后第15天用全自動生化分析儀測各組大鼠的血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)，殺檢測腎/體比(Index)，并取左側(cè)腎臟行病理切片，光鏡下觀察各組大鼠腎間質(zhì)及腎小管的變化情況，免疫組化法檢測TGF-β1、ColⅢ在腎間質(zhì)及腎小管的表達(dá)情況，并用病理圖像分析軟件進(jìn)行半定量分析。 結(jié)果： 1.Index、SCr、BUN檢測結(jié)果:實驗結(jié)束時，左側(cè)腎臟體積增大，大鼠Index模型組比假手術(shù)組明顯升高，纈沙坦組及龍

5、甲參芪湯組與模型組比較顯著降低，其中纈沙坦組較龍甲參芪湯組略低，但兩組間無統(tǒng)計學(xué)意義。SCr測定結(jié)果顯示，模型組明顯高于假手術(shù)組，纈沙坦組、龍甲參芪湯組大鼠的SCr與模型組比較顯著降低，其中纈沙坦組的SCr低于龍甲參芪湯組，但無統(tǒng)計學(xué)意義。BUN測定結(jié)果顯示，模型組大鼠BUN明顯高于假手術(shù)組，纈沙坦組、龍甲參芪湯組與模型組相比顯著降低，其中纈沙坦組BUN低于龍甲參芪湯組，但無統(tǒng)計學(xué)意義。 2.腎組織HE及天狼猩紅染色顯示：模型組

6、間質(zhì)大量炎性細(xì)胞浸潤和纖維組織增生，腎小管部分萎縮、管腔閉塞或擴(kuò)張，腎小球數(shù)目明顯減少，面積縮小，腎小囊黏連或擴(kuò)張，小囊周圍大量纖維組織增生。各治療組間質(zhì)可見多少不等的炎性細(xì)胞浸潤，少量纖維組織增生，腎小管輕度擴(kuò)張，部分腎小球輕度萎縮，小囊擴(kuò)張，腎小球數(shù)量無明顯改變。 3.TGF-β1在腎組織的表達(dá)、分布及半定量分析結(jié)果：TGF-β1主要在梗阻腎近曲小管上皮細(xì)胞胞漿及間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)呈強(qiáng)陽性表達(dá)，假手術(shù)組實驗動物在腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)TG

7、F-β1蛋白為弱陽性，其余各組在腎小管上皮細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞及腎小球內(nèi)表達(dá)顯著增強(qiáng)，其中模型組較假手術(shù)組TGF-β1的陽性面積及積分光密度值均呈顯著性升高，纈沙坦組、龍甲參芪湯組與模型組相比，TGF-β1的陽性面積及積分光密度均呈顯著性下降，提示龍甲參芪湯、纈沙坦均可抑制梗阻側(cè)腎組織TGF-β1的表達(dá)，纈沙坦組優(yōu)于龍甲參芪湯組，但無顯著性差異。 4.ColⅢ在腎組織的表達(dá)、分布及半定量分析結(jié)果：ColⅢ主要表達(dá)于梗阻腎的間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)。

8、假手術(shù)組大鼠腎間質(zhì)ColⅢ呈弱陽性表達(dá)，其余各組表達(dá)顯著增強(qiáng)，為條索狀或成片塊狀。其中，模型組與假手術(shù)組相比ColⅢ的陽性面積及積分光密度值呈顯著性升高，纈沙坦組、龍甲參芪湯組與模型組相比，ColⅢ的陽性面積及積分光密度值均呈顯著性下降，提示龍甲參芪湯、纈沙坦均可抑制梗阻側(cè)腎組織中ColⅢ的組織表達(dá)，其中，纈沙坦組優(yōu)于龍甲參芪湯組，但無顯著性差異。 5.腎間質(zhì)纖維化面積半定量分析結(jié)果模型組腎間質(zhì)纖維化程度較假手術(shù)組明顯加重；纈沙

9、坦組、龍甲參芪湯組與模型組比較，腎間質(zhì)纖維化面積明顯減少，提示龍甲參芪湯及纈沙坦均有拮抗腎間質(zhì)纖維化的作用。其中，纈沙坦組優(yōu)于龍甲參芪湯組，但無顯著性差異。 結(jié)論： 1.龍甲參芪湯能降低血清肌酐、尿素氮，降低腎臟指數(shù)，保護(hù)腎功能。 2.龍甲參芪湯能抑制TGF-β1、ColⅢ在腎組織的表達(dá)，從而減少病變腎組織ECM成分的合成及積聚，延緩腎間質(zhì)纖維化的進(jìn)程。 3.龍甲參芪湯對UUO大鼠腎間質(zhì)纖維化的拮抗作用與