聚蛋白多糖酶和基質(zhì)金屬蛋白酶在骨關節(jié)炎不同時期關節(jié)液中的表達.pdf

1、目的：
　　 骨關節(jié)炎(OA)是一種以進行性關節(jié)軟骨破壞為主要特征的關節(jié)疾病，其中聚蛋白多糖的丟失是關節(jié)軟骨破壞的主要早期病理表現(xiàn)。目前研究表明，聚蛋白多糖酶和基質(zhì)金屬蛋白酶是與聚蛋白多糖的降解密切相關的兩組酶，但在人類疾病狀態(tài)下哪種酶起主要作用仍然存在爭議。已有多個研究分別對聚蛋白多糖酶和基質(zhì)金屬蛋白酶在人類骨關節(jié)炎病變關節(jié)中的表達水平進行檢測，但以上各酶及其蛋白降解產(chǎn)物在骨關節(jié)炎不同時期關節(jié)液中的表達及其作用的研究尚無報道。

2、本研究的目的是觀察和比較聚蛋白多糖酶(ADAMTS-4、5)和基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-1、3)以及蛋白產(chǎn)物在骨關節(jié)炎不同時期關節(jié)液中的表達，探討其在早、中、晚期骨關節(jié)炎中的作用。
　　 材料和方法：
　　 選擇2008年6月至2011年5月就診的膝關節(jié)OA患者144例，男性38例，女性106例，年齡18歲-86歲，平均58.5歲±13.6歲。所有患者膝關節(jié)軟骨退變的程度根據(jù)MRI Recht分級標準和關節(jié)鏡下Outerb

3、ridge分級標準進行分級，并根據(jù)分級結果進行早、中、晚期分組，其中Ⅰ-Ⅱ級組成早期OA組（65例），Ⅲ級組成中期OA組（25例），Ⅳ級組成晚期OA組（54例）。應用酶聯(lián)免疫吸附法(ELI SA)對144例關節(jié)液中ADAMTS-4、ADAMTS-5、MMP-1、MMP-3及蛋白產(chǎn)物ARGxx、FFGxx的表達水平進行檢測，以ELISA光密度(OD)值代表所測各項在關節(jié)液中的濃度。應用蛋白免疫印跡法(Western blot)對24例關節(jié)

4、液（早、中、晚期OA組各8例）中ADAMTS-4、ADAMTS-5、MMP-1、MMP-3及蛋白產(chǎn)物ARGxx、FFGxx的蛋白表達進行測定，以甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)作為內(nèi)參。所測各指標在早、中、晚期OA組之間的差異用單因素方差分析和Kruskal-Wallis檢驗分析，兩組間的兩兩比較采用最小顯著性差異法(LSD法)分析，聚蛋白多糖酶、基質(zhì)金屬蛋白酶與其蛋白產(chǎn)物之間的相關性分析采用直線相關分析。
　　 結果：

5、r>　　 (1)比較酶聯(lián)免疫吸附試驗的OD值發(fā)現(xiàn):ADAMTS-4、5在早期和晚期OA關節(jié)液中的表達水平明顯升高，且ADAMTS-4在早期OA關節(jié)液中的表達水平顯著高于晚期OA關節(jié)液中的表達水平(P＜0.01); MMP-1在晚期OA關節(jié)液中高表達，而MMP-3在早期OA關節(jié)液中高表達（P＜0.05）;ARGxx在早期OA關節(jié)液中的表達水平顯著高于中、晚期OA關節(jié)液中的表達水平(P＜0.01)，而FFGxx主要出現(xiàn)在晚期OA關節(jié)液中（

6、P＜0.01）;
　　 (2)通過對比ELISA結果發(fā)現(xiàn):ADAMTS-5、MMP-3、ARGxx在3組關節(jié)液中的表達水平均分別高于ADAMTS-4、MMP-1、FFGxx在相應各組關節(jié)液中的表達水平(P＜0.01)。
　　 (3)相關性分析結果顯示:OA關節(jié)液中ADAMTS-4和ADAMTS-5的表達均與ARGxx呈正相關，但ADAMTS-4與ARGxx的相關性(r=0.530)高于ADAMTS-5（r=0.258）;

7、MMP-3的表達與產(chǎn)物FFGxx呈正相關(r=0.475，P＜0.01)，MMP-1與產(chǎn)物FFGxx無明顯相關性(P＞0.05)。
　　 (4)蛋白免疫印跡分析結果顯示:ADAMTS-4在早期OA組高表達（P＜0.05），ADAMTS-5在早期和晚期OA組高表達（P＜0.05）;MMP-1及FFGxx在晚期OA組高表達（P＜0.05）;MMP-3在早期OA組的表達量高于中期的表達（P＜0.05）;ARGxx在早、晚期OA組的表達