小鼠LIGHT真核表達載體的構(gòu)建及其與乙肝核酸疫苗的聯(lián)合免疫研究.pdf

1、感染HBV能導(dǎo)致急性、慢性肝炎，與肝硬化及肝細胞癌有密切關(guān)系。目前，控制HBV感染的有效方法是接種乙肝疫苗。基因疫苗的興起和發(fā)展為乙型肝炎病毒感染的防治提供了新的途徑?；蛞呙缈烧T導(dǎo)機體產(chǎn)生細胞及體液免疫反應(yīng)，特別是誘導(dǎo)細胞免疫反應(yīng)的能力優(yōu)于蛋白、多肽類疫苗，在乙型肝炎病毒的清除方面具有較好的應(yīng)用前景，更適應(yīng)于慢性病毒感染的預(yù)防與治療。 核酸疫苗的免疫效果在不同動物個體中差異較大，某些腫瘤及病毒的T、B細胞表位抗原性弱，難以誘導(dǎo)

2、有效的T、B細胞免疫應(yīng)答，提高核酸疫苗的免疫效果己成為研究熱點?；蜃魟┦菍⒕幋a某些細胞因子及T、B細胞表面共刺激分子等的基因與目的基因克隆于同一載體或不同載體共同免疫動物，其表達的相應(yīng)蛋白可起到佐劑的作用，從而大大增強T、B細胞的免疫應(yīng)答水平。 LIGHT是TNF配體家族的成員，可以共刺激T細胞增殖。HVEM是LIGHT介導(dǎo)T細胞活化的受體，LIGHT通過與HVEM結(jié)合發(fā)揮共刺激作用，參與T細胞增殖和細胞因子的產(chǎn)生。越來越多的

3、證據(jù)表明LIGHT與其受體的相互作用可作為控制細胞免疫應(yīng)答的潛在目標。 本研究對小鼠LIGHT作為乙肝核酸疫苗的基因佐劑方面進行了初步研究。在克隆小鼠LIGHT基因的基礎(chǔ)上，構(gòu)建其胞外段基因的原核表達載體，在大腸桿菌中進行誘導(dǎo)表達并對其表達條件進行了初步的探索；構(gòu)建LIGHT全長基因的真核表達質(zhì)粒并在體外轉(zhuǎn)染細胞，檢測結(jié)果表明真核表達質(zhì)粒中的LIGHT基因可在哺乳動物細胞中進行表達；混合淋巴細胞反應(yīng)中LIGHT轉(zhuǎn)染的樹突狀細胞可