鹿源布魯氏菌外膜蛋白Omp31基因的克隆與原核表達(dá).pdf

1、布魯氏菌病(Brucellosis)是由布魯氏菌(Brucella)引起的人畜共患傳染病，主要宿主是羊、牛和豬，呈世界范圍流行，并且鹿場感染布魯氏菌的現(xiàn)象逐漸增多。近幾年來，布魯氏菌病在中國的流行呈上升趨勢，嚴(yán)重危害了畜牧業(yè)發(fā)展和人類健康。目前，對(duì)易感動(dòng)物進(jìn)行疫苗免疫和對(duì)患病動(dòng)物進(jìn)行撲殺是防控布魯氏菌病的有效手段。所以，利用生物學(xué)手段研制出高效、安全的疫苗，并迅速對(duì)布魯氏菌病進(jìn)行準(zhǔn)確診斷是預(yù)防布魯氏菌病的關(guān)鍵。
　　在布魯氏菌眾多

2、具有抗原保護(hù)作用的外膜蛋白中，Omp31作為布魯氏菌的免疫保護(hù)性抗原，能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生中和抗體，是基因工程疫苗的理想候選基因，也是用于布魯氏菌臨床診斷的首選基因和蛋白。此外，外膜蛋白Omp31是布魯氏菌的毒力基因，高度保守，Omp31基因的缺失可降低布魯氏菌的毒力，所以可以通過缺失Omp31基因來研制基因缺失疫苗。本研究從疑似感染布魯氏菌的鹿病料中提取基因組DNA，經(jīng)PCR擴(kuò)增和TA克隆，構(gòu)建克隆載體pMD18T-Omp31，經(jīng)轉(zhuǎn)化和提取

3、質(zhì)粒，以及BamHⅠ和XhoⅠ雙酶切，將獲得的Omp31基因亞克隆至pET28a原核表達(dá)載體，構(gòu)建pET28a-Omp31原核表達(dá)載體，將其轉(zhuǎn)化入大腸桿菌BL21感受態(tài)，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)，使Omp31基因在大腸桿菌BL21感受態(tài)中表達(dá)，并經(jīng)Western Blot確定該重組蛋白的反應(yīng)原性。結(jié)果顯示，本研究成功構(gòu)建了原核表達(dá)載體pET28a-Omp31，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)，其可在大腸桿菌BL21感受態(tài)中獲得穩(wěn)定表達(dá)，Omp31重組蛋白以包涵體形