孔雀石綠替代藥物的篩選及其對水霉病的防治效果研究.pdf

1、本實驗論文共分為四個部分。第一部分：魚類水霉病人工感染方法的建立；第二部分：藥物篩選；第三部分：初篩目標藥物的臨床藥效及安全性評價、第四部分：初篩目標藥物復配制劑的臨床藥效及安全性評價。具體內(nèi)容如下： 第一部分：實驗選擇對魚體肌肉刮傷、養(yǎng)殖水溫度劇變、水霉菌株浸泡魚體三個條件對草魚、鯽進行水霉病人工感染。通過根據(jù)不同條件分組的感染結果分析確定影響水霉病人工感染的條件。實驗結果顯示選擇上述任何單一條件都無法對草魚、鯽成功進行感染，

2、而選擇魚體肌肉刮傷、養(yǎng)殖水溫度劇變、水霉菌株浸泡魚體三個條件同時實施則取得了非常好的效果，該實驗組的草魚、鯽24h內(nèi)即可被成功感染，且感染率為100％±0，實驗表明受傷是感染水霉病的一個必要條件，而溫度變化是感染水霉病的一個重要影響條件。進而對該方法做三次重復性實驗，每次設三個平行對照缸，進行可靠性評價，F(xiàn)檢驗結果顯示該方法下對草魚、鯽人工感染，各重復次數(shù)間差異不顯著(P>0.05)，該方法具有良好的重現(xiàn)性、可靠性好，成功建立了魚類水霉

3、病的人工感染方法。該方法的建立為抗水霉藥物的篩選和藥物臨床藥效實驗提供了可靠的病理模型來源，同時也為水霉病發(fā)生、發(fā)展規(guī)律的研究提供理論依據(jù)。 第二部分：以藥物對水霉的體外作用效果為篩選模型，對待篩選藥物庫的藥物進行體外初步篩選。由于篩選藥物藥物數(shù)量較大，僅以初篩目標化合物BYK-1為例進行方法說明。通過該模型，篩選出包括初篩目標化合物BYK-1在內(nèi)的幾種對水霉體外作用效果較好的初篩目標化合物。初篩目標化合物BYK-1對水霉孢子三

4、個菌量的MIC均為3mg/L。對水霉菌絲的三個菌量在8mg/L濃度下作用1h即有殺滅作用，且隨著濃度的升高，有效殺滅時間也隨之降低。 第三部分：對初篩目標化合物BYK．1進行復篩，復篩內(nèi)容包括實驗室臨床藥效、安全性評價。實驗顯示初篩目標化合物BYK-1對水霉病的預防有很好的保護率，其中潑灑方式在藥物濃度為3mg/L時對草魚、鯽的保護率分別可達到90％、96.7％；浸泡方式在濃度為16mg/L時對草魚、鯽的保護率分別為83.3％、

5、80％；在治療方面實驗結果顯示，浸泡用藥方式效果遠好于潑灑方式，潑灑方式在3mg/L 濃度時對草魚、鯽的保護率僅有6.67％和13.3％，而浸泡方式對草魚和鯽的保護率均為43.3％。安全性實驗(急性毒性實驗)結果顯示在水溫20℃時，初篩目標化合物BYE-1對草魚、鯽的半數(shù)致死濃度LD50 分別為15.73、16.90mg/L，相應的安全濃度則分別為1.573、1.690。 第四部分：擬通過藥物復配，利用藥物間的協(xié)同作用，達到提高

6、藥效、降低毒性的作用。體外藥效實驗表明初篩目標化合物BYK-1與F-1按1：3比例復配效果最佳。臨床藥效實驗顯示：在預防方面：潑灑方式用藥，單獨使用初篩目標化合物BYK-1在3mg幾濃度下對草魚、鯽的保護率分別為90％、96.7％，而復配后在0.8mg/L濃度下分別達到96.7％、100％。浸泡方式用藥，單獨使用初篩目標化合物BYK-1在16mg/L時對草魚、鯽的保護率分別為83.3％、80％，而復配后8mg/L濃度時對草魚、鯽水霉病的

7、保護率達到93.3％、100％；從治療方面來看，潑灑用藥方式下單獨使用初篩目標化合物BYK-1在濃度3mg幾濃度時對草魚、鯽的保護率僅有6.67％和13.3％，而復配后1.5mg/L濃度時對草魚、鯽的保護率36.7％和40％。浸泡用藥方式下16mg/L時對草魚和鯽的保護率為50％、53.3％。對草魚、鯽的半數(shù)致死濃度LD50 分別由復配前的15.73、16.90mg/L提高到18.36、20.45mg/L，相應的安全濃度也由復配前的1.