不同survivin siRNA對PC-3細(xì)胞增殖和凋亡的影響.pdf

1、目的： 觀察靶向survivin基因的不同siRNA在不同時(shí)間點(diǎn)對人雄激素非依賴性前列腺癌PC-3細(xì)胞survivin mRNA表達(dá)的抑制作用以及對細(xì)胞增殖和凋亡的影響。 方法： 本研究以雄激素非依賴性前列腺癌PC-3細(xì)胞株為研究對象，采用針對survivin基因二個(gè)不同位點(diǎn)，分別設(shè)計(jì)單獨(dú)及同時(shí)負(fù)載二個(gè)survivin shRNA片段質(zhì)粒載體。以脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染PC-3細(xì)胞株后，在熒光顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染效率。實(shí)驗(yàn)分為s

2、urvivin1組、survivin2組、survivin1+2組、陰性對照組和空白對照組。轉(zhuǎn)染后24 h、48 h和72 h，用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測細(xì)胞中survivin mRNA的表達(dá)，MTT法檢測siRNA對PC-3細(xì)胞增殖的影響，流式細(xì)胞術(shù)檢測凋亡率。 結(jié)果： 與對照組相比，survivin1組、survivin2組、survivin1+2組轉(zhuǎn)染后24 h即對survivin mRNA的表

3、達(dá)均能產(chǎn)生抑制效應(yīng)，48 h抑制率最高，72 h后下降。三個(gè)實(shí)驗(yàn)組以survivin1抑制率最高，轉(zhuǎn)染48 h后達(dá)到52％。實(shí)驗(yàn)組均能抑制PC-3細(xì)胞的增殖，其中以Survivin1抑制細(xì)胞的增殖能力最強(qiáng)。在誘導(dǎo)PC-3細(xì)胞的凋亡的研究中，質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞轉(zhuǎn)染48 h后，細(xì)胞凋亡最明顯，其中survivin1組凋亡率較高，達(dá)(13.6％±1.8％)。 結(jié)論： 負(fù)載survivin shRNA的質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染PC-3細(xì)胞后，能明