滑膜肉瘤相關(guān)生物標(biāo)志物的臨床病理研究.pdf

1、研究目的： 研究生物標(biāo)志物E-cad、β-cat、P27、CyclinDl、MT、Ki-67及EGFR在滑膜肉瘤組織中的表達(dá)與腫瘤生物學(xué)特點(diǎn)，并探討上述標(biāo)志物與患者術(shù)后生存時(shí)間的關(guān)系。尋找新的與滑膜肉瘤預(yù)后相關(guān)的分子標(biāo)記物，以期為臨床提供更多的信息，指導(dǎo)治療，減少?gòu)?fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移． 研究方法： 本實(shí)驗(yàn)為回顧性研究：復(fù)習(xí)解放軍總醫(yī)院病理科1993年5月-2006年5月間手術(shù)切除、福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋的滑膜肉瘤組織標(biāo)

2、本共88例，2例來自尸檢，總計(jì)90例。經(jīng)導(dǎo)師復(fù)讀HE染色切片，結(jié)合細(xì)胞角蛋白(Cytokeratin)、上皮膜抗原(EMA)、波形蛋白(Vimentin)、Bcl-2及CD99等免疫組化染色結(jié)果確定并排除可疑標(biāo)本，得到83例。隨后按照Bergh等人的標(biāo)準(zhǔn)分類，查閱相關(guān)病歷，并對(duì)其進(jìn)行隨訪．最終得到完整的臨床資料、病理資料及隨訪資料60例(其中包括2例尸檢)． 免疫組化染色：采用PV6000二步法，檢測(cè)60例滑膜肉瘤中E-鈣粘素(

3、E-cad)、β-連接素(β-cat)、P27、CyclinDl、金屬硫蛋白(MT)、Ki-67和EGFR陽(yáng)性表達(dá)率及β-cat的異常表達(dá)率，分析其與臨床病理資料及預(yù)后的關(guān)系。 EGFR基因突變的檢測(cè)：提取20例滑膜肉瘤石蠟標(biāo)本的DNA，進(jìn)行定量測(cè)定，并采用聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，用擴(kuò)增產(chǎn)物來進(jìn)行純化及測(cè)序分析，觀察其EGFR基因第18、19、20及21外顯子的突變情況． 結(jié)果： 1．滑膜肉瘤相關(guān)生物標(biāo)志物

4、的表達(dá)及其與臨床病理資料及生存率的關(guān)系1)各生物標(biāo)志物在滑膜肉瘤中表達(dá)的陽(yáng)性率分別為E-cad28.3％(17/60)，β-cat23.3％(14/60)，β-cat異常表達(dá)45％(27/60)，P2745％(27/60)，CyclinDl40％(24/60)，MT56.6％(34/60)，Ki-6746.6％(28/60)，EGFR28.3％(17/60)． 2)與分型有關(guān)的是E-cad、β-cat及β-cat異常表達(dá)．E-c

5、ad及β-cat的陽(yáng)性表達(dá)與病理學(xué)分型呈負(fù)相關(guān)，而β-cat異常表達(dá)與其呈正相關(guān)。其中在雙相型滑膜肉瘤中E-cad和β-cat的陽(yáng)性表達(dá)率均明顯高于單相型及低分化型滑膜肉瘤(P均＜0.05)，β-cat的異常表達(dá)在雙相型滑膜肉瘤中的陽(yáng)性率明顯低于單相型及低分化型滑膜肉瘤(P=0.001)。此外，β-cat非異常表達(dá)陽(yáng)性率自組織學(xué)分級(jí)Ⅱ級(jí)至Ⅲ級(jí)為逐級(jí)減弱(P=025)，而β-cat的異常表達(dá)在Ⅱ級(jí)至Ⅲ級(jí)中有逐漸增強(qiáng)的趨勢(shì)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

6、β-cat的異常表達(dá)還與患者腫瘤部位、刪分期及轉(zhuǎn)移有關(guān)，與患者腫瘤部位、TNM分期及轉(zhuǎn)移均呈正相關(guān)(P均＜0.05)；β-cat的異常表達(dá)在四肢的陽(yáng)性率明顯高于軀干(P=0.004)，TNM分期越高β-cat的異常表達(dá)率越高(P=0.007)，β-cat異常表達(dá)在轉(zhuǎn)移組的陽(yáng)性率明顯高于未轉(zhuǎn)移組(P=0.000)，而E-cad和β-cat在未轉(zhuǎn)移組的陽(yáng)性率有高于轉(zhuǎn)移組的趨勢(shì)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 P27與腫瘤轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)，而Cycli

7、nDl與轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)；P27未轉(zhuǎn)移組的陽(yáng)性率高于轉(zhuǎn)移組(P=0.025)，而CyclinDl則轉(zhuǎn)移組的陽(yáng)性率高于未轉(zhuǎn)移組(P=0.033)。此外，P27陽(yáng)性表達(dá)與腫瘤組織學(xué)分級(jí)呈負(fù)相關(guān)；P27在組織學(xué)Ⅱ級(jí)的陽(yáng)性率明顯高于Ⅲ級(jí)(P=0.044)。 MT與Ki-67陽(yáng)性表達(dá)均與轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，兩者轉(zhuǎn)移組的陽(yáng)性率明顯高于未轉(zhuǎn)移組的陽(yáng)性率(P均＜0.05)。此外，Ki-67與腫瘤直徑呈正相關(guān)，腫瘤直徑＜5cm的陽(yáng)性率低于直徑≥5cm的陽(yáng)性

8、率(P=0.047)。MT還與組織學(xué)分級(jí)和TNM分期呈正相關(guān)；組織學(xué)分級(jí)和TNM分期高者M(jìn)T陽(yáng)性率高(P均＜0.05)。EGFR的陽(yáng)性表達(dá)與患者性別、年齡、腫瘤直徑、部位、分型、TNM分期、組織學(xué)分級(jí)、及轉(zhuǎn)移情況等均無關(guān)(P均＞0.05)． 3)單因素生存分析顯示，TNM分期、組織學(xué)分級(jí)、轉(zhuǎn)移、MT、P27、E-cad、β-cat異常表達(dá)及Ki-67等8種因素與滑膜肉瘤患者的術(shù)后生存時(shí)間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異：TNM分期及組織學(xué)分級(jí)級(jí)別

9、越高的患者術(shù)后生存時(shí)間越短(分別為P=0.000、P=0.048)；未轉(zhuǎn)移組患者較轉(zhuǎn)移組患者的術(shù)后生存時(shí)間長(zhǎng)(P=0.000)。MT與Ki-67陽(yáng)性表達(dá)組患者的術(shù)后生存時(shí)間均短于陰性表達(dá)組(分別為P=0.010、P=0.027)；P27陽(yáng)性表達(dá)組患者較陰性表達(dá)組患者的術(shù)后生存時(shí)間長(zhǎng)(P=0.008)；滑膜肉瘤中E-cad陽(yáng)性表達(dá)組患者較陰性表達(dá)組患者的術(shù)后生存時(shí)間長(zhǎng)(P=0.042)；β-cat異常表達(dá)的陰性表達(dá)組患者較陽(yáng)性表達(dá)組患者的

10、術(shù)后生存時(shí)間長(zhǎng)(P=0.002)，同時(shí)β-cat非異常表達(dá)組患者較異常表達(dá)組患者的術(shù)后生存時(shí)間長(zhǎng)(P=0.007)。隨后Cox多因素生存分析顯示，3種入選模型，分別是MT、P27及轉(zhuǎn)移。MT陰性表達(dá)、P27陽(yáng)性表達(dá)及未發(fā)生轉(zhuǎn)移者術(shù)后生存時(shí)間長(zhǎng)，預(yù)后較好。 2．滑膜肉瘤中EGFR基因突變的檢測(cè)在20例滑膜肉瘤EGFR基因突變的檢測(cè)中，2例免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示EGFR表達(dá)為陽(yáng)性的病例經(jīng)過了測(cè)序分析，突變率為10％．結(jié)果顯示：1例

11、EGFR基因第20號(hào)外顯子發(fā)生了一處錯(cuò)義突變，突變位點(diǎn)位于第796號(hào)密碼子2386位堿基處(GGC→AGC)，氨基酸由甘氨酸變?yōu)榻z氨酸(Gly→Ser)；另1例EGFR基因第19號(hào)外顯子發(fā)生了一處錯(cuò)義突變，突變位點(diǎn)位于第731號(hào)密碼子2191位堿基處(TGG→CGG)，氨基酸由色氨酸變?yōu)榫彼?Trp→Arg)。此外，還有2例患者(經(jīng)免疫組織化學(xué)染色顯示：1例EGFR染色呈陽(yáng)性表達(dá)，1例呈陰性表達(dá))檢測(cè)出EGFR基因發(fā)生了同義突變，突變

12、率為10％。1例為第20號(hào)外顯子第787號(hào)密碼子2361位堿基處(Gln：CAG→CAA)；1例為第18號(hào)外顯子第725號(hào)密碼子2175位堿基處(Thr：ACG→ACA)．提示EGFR基因酪氨酸激酶區(qū)域在滑膜肉瘤中的突變相當(dāng)罕見，且可能僅有少數(shù)患者有機(jī)會(huì)從EGFR受體酪氨酸激酶的靶向治療中受益。因此，對(duì)于EGFR基因表達(dá)的突變與指導(dǎo)臨床用藥治療還需大量樣本進(jìn)一步探討及證實(shí)。 結(jié)論： 1．MT、P27及轉(zhuǎn)移是滑膜肉瘤的獨(dú)立

13、預(yù)后因子。 2．E-cad、β-cat、P27、CyclinDl、MT及Ki-67均與滑膜肉瘤的發(fā)生發(fā)展和(或)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，細(xì)胞黏附因子E-cad表達(dá)下調(diào)及β-cat的異常表達(dá)可能導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞間的黏附力減弱、運(yùn)動(dòng)能力加強(qiáng)；細(xì)胞周期素依賴性激酶抑制劑P27限制性的調(diào)節(jié)了細(xì)胞周期進(jìn)程等。上述生物標(biāo)志物表達(dá)的變化可能對(duì)滑膜肉瘤的演化和進(jìn)展起重要作用，并可能成為新的臨床輔助診斷和監(jiān)測(cè)預(yù)后的指標(biāo)。 3．在滑膜肉瘤中，EGFR基因