宮頸癌原代細胞的分離及腫瘤干細胞標(biāo)記物的檢測.pdf

1、背景與目的:
　　宮頸癌是危害婦女健康的主要惡性腫瘤之一，盡管人類從未停止過對宮頸癌的研究，并取得了很大突破，但是宮頸癌仍是嚴重威脅廣大婦女身心健康的危險因素之一。隨著腫瘤干細胞學(xué)說的興起，宮頸癌干細胞的研究也逐漸起步，研究人員試圖通過尋找宮頸癌干細胞為宮頸癌的診治開辟新路。標(biāo)記物的研究是宮頸癌干細胞研究的前提，目前已發(fā)現(xiàn)了一些可能成為腫瘤干細胞的標(biāo)記物，如CD44、CD24、CD133、ABCG2等，但這些標(biāo)記物是否可以成為宮頸

2、癌干細胞的標(biāo)記物，仍需要更多的研究來證實。本研究結(jié)合目前腫瘤干細胞的研究成果，對宮頸癌原代細胞進行分離和培養(yǎng)，并采用流式細胞儀檢測腫瘤干細胞標(biāo)記物CD44和CD24在宮頸癌原代細胞中是否有表達，同時檢測其在外周血中的表達;此外，本實驗采用免疫組化和免疫熒光雙染法定位檢測兩種標(biāo)記物在宮頸癌中的表達，以豐富實體瘤的研究。
　　方法:
　　收集2011年10月1日至2012年10月1日在河南省鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院行婦科手術(shù)的宮頸癌

3、患者標(biāo)本（包括癌組織和外周血），臨床分期(ⅠA～ⅡB期)16例，按國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(International Federation of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO)分期標(biāo)準(zhǔn):ⅠA期4例、ⅠB期5例、ⅡA期4例和ⅡB期3例。癌組織病理類型為浸潤性鱗狀上皮癌，患者中位年齡56歲(32～71歲);同期河南省鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦科行子宮全切術(shù)的正常宮頸組織10例作為對照;患者中位年齡43歲(26～63歲)。

4、首先應(yīng)用蛋白酶消化法分離宮頸癌組織，然后用腫瘤干細胞培養(yǎng)液培養(yǎng)分離出的懸浮細胞，培養(yǎng)一段時間后，因原代細胞雜質(zhì)較多，再用淋巴細胞分離液分離可得到較為純凈的細胞球。外周血的分離采用淋巴細胞分離液分離以獲得單個核細胞;然后應(yīng)用流式細胞儀檢測腫瘤干細胞標(biāo)記物CD44和CD24在宮頸癌原代細胞及外周血中的表達情況，最后應(yīng)用免疫組化和免疫熒光雙染的方法檢測CD44和CD24在宮頸癌組織的表達情況。
　　結(jié)果:
　　1.宮頸癌原代培養(yǎng)過

5、程顯示:采用蛋白酶消化法和腫瘤干細胞培養(yǎng)液培養(yǎng)能得到宮頸癌懸浮細胞球;但在正常宮頸組織無法得到懸浮細胞球。
　　2.流式細胞儀檢測腫瘤干細胞標(biāo)記物CD44和CD24，結(jié)果顯示在宮頸癌懸浮細胞球表面表和外周血中均有CD44和CD24表達，而且有CD44+單陽，CD24+單陽，CD44+CD24+雙陽的細胞群;但在正常宮頸組織和健康對照者外周血中無CD44和CD24的表達。
　　3.免疫組化顯示:CD44和CD24表達于宮頸癌組