子宮頸病變中P16蛋白表達(dá)及其與HPV16-18感染的關(guān)系.pdf

1、目的：子宮頸癌是女性生殖器官常見的惡性腫瘤之一，是女性第二大致死性疾病，發(fā)病率呈年輕化和不斷上升趨勢。全世界每年約有50萬新發(fā)病例，僅次于乳腺癌。大多數(shù)宮頸癌是由癌前病變——子宮頸上皮內(nèi)瘤變（cervical Intraepithelial neoplasia，CIN）逐步發(fā)展形成的，早期診治可以有效避免病變的進(jìn)展和轉(zhuǎn)化。對有些癌前病變，因受觀察者主觀因素的影響，難以做出準(zhǔn)確診斷。因此，尋找用于宮頸癌前病變的輔助診斷，十分重要。

2、　　 目前普遍認(rèn)為宮頸癌變與高危型人類乳頭狀瘤病毒16/18型（HPV16/18型）的持續(xù)感染密切相關(guān)。HPV的致癌過程常伴有原癌基因的突變或抑癌基因的失活，p16基因又稱多腫瘤抑制基因（multipie tumor suppressor，MTS1），它是人們發(fā)現(xiàn)的第一個直接作用于細(xì)胞周期，抑制細(xì)胞分裂的基因。以往研究證實(shí)，在子宮頸癌發(fā)生過程中存在P16蛋白表達(dá)異常，但其表達(dá)是升高，還是降低說法不一；近年來，P16與宮頸癌的關(guān)系已有較

3、多研究，但對于P16蛋白表達(dá)在CIN組織病理學(xué)診斷和分級中的作用及意義尚未明確。
　　 本課題通過自制組織芯片檢測正常宮頸鱗狀上皮、CIN、宮頸鱗癌中P16蛋白的表達(dá)及HPV16/18感染的情況，研究病毒感染在子宮頸癌變過程中的作用；觀察P16蛋白在不同病變中的表達(dá)，探討P16蛋白過表達(dá)在宮頸癌變中的意義；研究宮頸鱗癌及CIN組織中HPV感染與P16蛋白表達(dá)的密切關(guān)系，分析HPV16/18感染對P16蛋白表達(dá)的影響，從而為臨床尋

4、找更為客觀可靠的指標(biāo)用以監(jiān)測病變的進(jìn)展，以及為進(jìn)一步揭示HPV致癌機(jī)制及協(xié)同作用因素提供依據(jù)，對子宮頸癌的早期預(yù)防、早期發(fā)現(xiàn)、早期治療有重要的現(xiàn)實(shí)意義。
　　 方法：
　　 1 收集子宮頸組織標(biāo)本168例，其中宮頸鱗癌44例，CIN96例，正常宮頸28例。
　　 2 應(yīng)用自制組織芯片技術(shù)將168例供體標(biāo)本，按陣列設(shè)計(jì)順序依次放入受體蠟塊中，融合、切片、撈片、烤片制成需要的組織芯片。
　　 3 應(yīng)用免疫組織

5、化學(xué)技術(shù)（SP法）測定宮頸鱗癌、CIN、正常宮頸鱗狀上皮組織中P16表達(dá)。
　　 4 采用原位雜交技術(shù)檢測 HPV-DNA16/18在宮頸鱗癌、CIN及正常宮頸鱗狀上皮組織中的表達(dá)情況。
　　 5 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料進(jìn)行X2檢驗(yàn)、等級資料采用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)、相關(guān)性采用Spearman秩相關(guān)分析。以α=0.05為檢驗(yàn)水準(zhǔn)，當(dāng)P<0.05時具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 1、組織芯片

6、制備
　　 按課題需要制作7×5，6×5芯片共5張，組織點(diǎn)陣排列整齊，無點(diǎn)陣移位現(xiàn)象，有11個位點(diǎn)缺失或組織無意義，其他位點(diǎn)均可見足夠的組織結(jié)構(gòu)。組織位點(diǎn)的形態(tài)可觀測率在90％以上。
　　 HE染色均勻，無脫片、異位和皺折。免疫組織化學(xué)染色及原位雜交，陽性定位清楚，背景干凈，無掉片現(xiàn)象。
　　 2、P16在宮頸上皮不同病變中的表達(dá)
　　 采用免疫組織化學(xué)方法檢測41例宮頸鱗癌、90例CIN及28例正常宮頸

7、鱗狀上皮組織中P16的表達(dá)。正常宮頸鱗狀上皮中P16缺乏表達(dá)，病變組織中P16的表達(dá)有明顯的分層現(xiàn)象，低級別的CIN中陽性細(xì)胞主要局限于中下層，而高級別的CIN則可超過上皮層的下2/3或達(dá)全層。P16陽性表達(dá)率：宮頸鱗癌100％（41/41），CINⅢ級96.67％（29/30）、CINⅡ級96.30％（26/27）、CINⅠ級42.42％（14/33）。P16在正常宮頸、各級別CIN及宮頸鱗癌中的陽性表達(dá)強(qiáng)度之間比較，結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

8、（P<0.05），且隨著病變程度的增加，陽性表達(dá)以過表達(dá)即中度陽性（++）～強(qiáng)陽性（+++）為主。在正常宮頸和CINⅠ級，CINⅠ級與CINⅡ級之間，P16陽性表達(dá)率比較，結(jié)果有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；CINⅡ級與CINⅢ級及CINⅢ級與宮頸鱗癌之間，均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　 3、HPV-DNA16/18在宮頸上皮不同病變中的表達(dá)
　　 采用原位雜交技術(shù)檢測HPV-DNA16/18在41例宮頸鱗癌、90

9、例CIN（包括30例CINⅢ，27例CINⅡ，33例CINⅠ）及28例正常宮頸鱗狀上皮組織中的表達(dá)。正常宮頸鱗狀上皮中HPV-DNA無表達(dá)，從CINⅠ到宮頸鱗癌，HPV-DNA的表達(dá)情況依次為15.2％（5/33）、44.4％（12/27）、60％（18/30）、53.7％（22/41），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。HPV-DNA陽性率在CIN病變及宮頸鱗癌中明顯高于正常宮頸鱗狀上皮（P<0.05），但在CINⅡ級與CINⅢ級、C

10、INⅢ級和宮頸鱗癌之間，HPV-DNA表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　 4、子宮頸病變中P16表達(dá)與HPV16/18感染的相關(guān)性分析子宮頸病變中HPV16/18陽性率越高，P16蛋白表達(dá)的程度越高，呈正相關(guān)（r=0.36，P<0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1、免疫組化方法標(biāo)記P16蛋白，在各級別CIN及宮頸鱗癌中其陽性表達(dá)率（+～+++）均高于正常宮頸組織，可協(xié)助鑒別正常宮頸鱗狀上皮與發(fā)生病變的鱗

11、狀上皮。
　　 2、免疫組化方法標(biāo)記P16蛋白，從正常宮頸鱗狀上皮到宮頸鱗癌，隨著病變程度的增加，中度陽性～強(qiáng)陽性（++～+++）表達(dá)逐漸增多，其陽性程度可協(xié)助判定病變程度。
　　 3、免疫組化方法標(biāo)記P16蛋白，正常宮頸鱗狀上皮中P16缺乏表達(dá)，P16的表達(dá)有明顯的分層現(xiàn)象，低級別的CIN中陽性細(xì)胞主要局限于中下層，而高級別的CIN則可超過上皮層的下2/3或達(dá)全層，有助于CIN級別的判定。
　　 4、原位雜交技