HIF-1α對(duì)DDAH1的調(diào)節(jié)及機(jī)制研究.pdf

1、研究目的：觀察DDAH1在CoCl2干預(yù)下的表達(dá)變化，以及HIF-1α在DDAH1基因調(diào)控的作用機(jī)制。
　　 方法與結(jié)果：選取200g 左右雄性wistar 大鼠若干，隨機(jī)分為2組分別為：CoCl2組大鼠腹腔注射CoCl2（30mg/kg）（n=8），NaCl組大鼠腹腔注射生理鹽水（n=8）。我們發(fā)現(xiàn)CoCl2模擬缺氧刺激可以增加DDAH1蛋白的表達(dá)。細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)用CoCl2 干預(yù)的HUVEC、293T和HepG2中DDA

2、H1的表達(dá)與HIF-1α有伴隨效應(yīng)。接下來的實(shí)驗(yàn)中我們利用HIF-1αSiRNA沉默HIF-1α蛋白的表達(dá)，實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明HIF-1α能夠調(diào)節(jié)DDAH1的表達(dá)。對(duì)DDAH1啟動(dòng)子區(qū)的基因序列進(jìn)行分析，我們發(fā)現(xiàn)有兩個(gè)HRE 元件，因此我們構(gòu)建了DDAH1的啟動(dòng)子區(qū)不同片段長度的熒光報(bào)告基因的質(zhì)粒，然后瞬時(shí)轉(zhuǎn)染到HepG2和HEK293T中，CoCl2 （200μM）干預(yù)8小時(shí)后我們檢測(cè)熒光素酶活性，結(jié)果表明在DDAH1 啟動(dòng)子-370～-

3、387 有可能是HIF-1α調(diào)控DDAH1啟動(dòng)子的活性區(qū)域。接著將上述質(zhì)粒的HRE 元件突變，即DDAH1啟動(dòng)子片段特定位點(diǎn)突變，轉(zhuǎn)染到細(xì)胞，我們發(fā)現(xiàn)在誘導(dǎo)HIF-1α高表達(dá)的情況下熒光素酶活性不增加。同時(shí)，Ch IP 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，HIF-1α能夠特異性的結(jié)合到DDAH1的啟動(dòng)子區(qū)。
　　 結(jié)論：我們證明DDAH1是缺氧誘導(dǎo)基因，其轉(zhuǎn)錄是通過HIF-1α結(jié)合到大鼠DDAH1啟動(dòng)子的-370～-387的HRE元件來調(diào)控DDAH1