HCN通道在神經(jīng)病理性痛及焦慮抑郁中的作用和機(jī)制研究.pdf

1、慢性神經(jīng)病理性痛和其伴發(fā)的焦慮抑郁產(chǎn)生機(jī)制復(fù)雜。最新研究發(fā)現(xiàn)外周神經(jīng)損傷后，超極化激活的環(huán)核苷酸門(mén)控通道(HCN)表達(dá)明顯改變，同時(shí)與焦慮、抑郁關(guān)系密切，但HCN通道在神經(jīng)病理性痛中的作用目前尚不清楚。
　　本研究擬探討三個(gè)問(wèn)題:1.側(cè)腦室給予HCN通道阻斷劑ZD7288是否可以緩解大鼠坐骨神經(jīng)分支阻斷模型(SNI)術(shù)后的疼痛，并改善動(dòng)物焦慮、抑郁行為?2.SNI術(shù)后腦內(nèi)HCN通道的變化如何，HCN通道的輔助亞基含Rab8b的TP

2、R結(jié)構(gòu)域相互作用蛋白（TRIP8b）是否參與調(diào)節(jié)？3.給藥后腦內(nèi)γ-氨基丁酸(GABA)的變化和其機(jī)制是否與谷氨酸脫羧酶(GAD)相關(guān)。
　　方法:128只Wistar Kyoto(WKY)大鼠（抑郁大鼠）分為三部分進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。首先選取40只WKY大鼠隨機(jī)分為Veh、ZD7288(2.5μg/kg)、ZD7288（5μg/kg）、ZD7288(10μg/kg)四組，通過(guò)自發(fā)活動(dòng)實(shí)驗(yàn)觀察ZD7288側(cè)腦室給藥后大鼠的自身活動(dòng)。其次28

3、只WKY大鼠隨機(jī)分為Sham、ZD7288(5μg/kg)、ZD7288（10μg/kg）、Saline四組，通過(guò)開(kāi)場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)、強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)觀察側(cè)腦室單次給予ZD7288后抑郁大鼠的焦慮、抑郁情緒。最后60只WKY大鼠隨機(jī)分為Sham、SNI、SNI+ ZD7288（5μg/kg）、SNI+ ZD7288(10μg/kg)、SNI+ Saline五組，通過(guò)機(jī)械性縮足反射實(shí)驗(yàn)、熱輻射潛伏期實(shí)驗(yàn)觀察ZD7288側(cè)腦室連續(xù)給藥1

4、4天痛閾的變化，通過(guò)開(kāi)場(chǎng)實(shí)驗(yàn)、高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)、懸尾實(shí)驗(yàn)觀察大鼠神經(jīng)病理性痛伴隨的焦慮、抑郁情緒。行為檢測(cè)后取材，通過(guò)免疫熒光染色觀察HCN通道的表達(dá)，同時(shí)觀察HCN與錐體神經(jīng)元、中間神經(jīng)元的共定位，通過(guò)western blot方法檢測(cè)丘腦和海馬內(nèi)HCN通道、輔助亞基TRIP8b和GAD的表達(dá)，通過(guò)高效液相色譜檢測(cè)大鼠腦內(nèi)GABA的含量，并通過(guò)全細(xì)胞膜片鉗記錄ZD7288(10μM)灌流后微小抑制性突觸后電流(mIPSCs)。
　

5、　結(jié)果:側(cè)腦室給予2.5μg/kg、5μg/kg、10μg/kg三種劑量ZD7288都不影響大鼠自發(fā)活動(dòng);側(cè)腦室單次給予ZD728810μg/kg可以增加抑郁大鼠在高架十字迷宮開(kāi)放臂的停留時(shí)間百分比，5μg/kg、10μg/kg兩組抑郁大鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)自主活動(dòng)時(shí)間延長(zhǎng);抑郁大鼠SNI術(shù)后側(cè)腦室連續(xù)14天給予ZD72885μg/kg、10μg/kg可以不同程度提高機(jī)械痛閾，以10μg/kg作用更明顯。在懸尾實(shí)驗(yàn)中，10μg/kg組自主活動(dòng)

6、明顯增加。Western blot結(jié)果顯示丘腦內(nèi)HCN2的表達(dá)明顯增加，給予ZD7288后HCN2的表達(dá)有不同程度下降，但是輔助亞基TRIP8b變化不明顯。在海馬內(nèi)，SNI術(shù)后HCN1表達(dá)上升，10μg/kg組HCN1表達(dá)明顯下降，并且TRIP8b的表達(dá)與HCN1呈相反趨勢(shì)。同時(shí)5μg/kg、10μg/kg兩組丘腦和海馬中GAD的表達(dá)與SNI組相比顯著升高。高效液相色譜結(jié)果顯示10μg/kg組丘腦中GABA表達(dá)明顯升高，5μg/kg、1