中藥提取物的活性篩選和“一測多評(píng)”技術(shù)在中藥中的應(yīng)用.pdf

1、本文從以下兩方面進(jìn)行了闡述。
　　一、中藥提取物的活性篩選。
　　本研究選取衛(wèi)生部2002年2月28日下發(fā)的《既是食品又是藥品的物品名單》及《可用于保健食品的物品名單》中的21種中藥，分別用水/醇提取制備了22個(gè)提取物進(jìn)行5個(gè)方面的活性篩選，以期尋找到具有抗老年性癡呆、降糖及降脂作用的中藥。實(shí)驗(yàn)中采用酶活性測定法，測定乙酰膽堿酯酶、A-beta.積聚、hIAPP積聚、α-葡萄糖苷酶及脂肪酶等抑制效力的方法，分別以毒扁豆堿、姜

2、黃素、阿卡波糖、奧利司他為陽性對(duì)照。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，淫羊藿提取物下顯示出較強(qiáng)的乙酰膽堿酯酶抑制作用，其抑制率為41.34％(毒扁豆堿抑制率為100％)；淫羊藿、香附、天麻、紅景天及金櫻子藥材提取物顯示出了較強(qiáng)A-beta積聚抑制作用，其活性抑制率分別為52.63％、62.58％、50.70％、46.86％、48.36％(姜黃素抑制率為66.78％)；絞股藍(lán)提取物顯示出一定的hlAPP積聚的抑制活性，抑制率為47.41％(姜黃素抑制率為70

3、.82％)；蒲黃、菟絲子、山藥、香附、紅景天及刺五加提取物顯示出一定的α-葡萄糖苷酶抑制活性，其抑制率分別為27.57％、31.34％、28.17％、26.72％、26.98％、29.40％(阿卡波糖抑制率為69.76％)；香附、紅景天提取物還顯示出一定的脂肪酶抑制活性，抑制率分別為40.74％和60.63％(奧利司他抑制率為95.45％)。本實(shí)驗(yàn)為進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)中藥中新的乙酰膽堿酯酶抑制劑、A-beta積聚抑制劑、hIAPP積聚抑制劑、α

4、-葡萄糖苷酶抑制劑及脂肪酶抑制劑積累了數(shù)據(jù)，并為開發(fā)具有抗老年性癡呆、降糖及降脂等作用的保健品及藥品提供了參考。
　　二、“一測多評(píng)”技術(shù)在中藥中的應(yīng)用。
　　中藥多成分、多功效的作用特點(diǎn)使得單指標(biāo)的質(zhì)量控制難以全面反映中藥的內(nèi)在質(zhì)量，多成分同步質(zhì)量控制勢在必行。在實(shí)際工作中，多成分同步質(zhì)量控制需要提供足量的對(duì)照品；而中藥對(duì)照品的難以分離或化學(xué)單體不穩(wěn)定導(dǎo)致對(duì)照品的供應(yīng)量不足，使得單一成分的質(zhì)量控制尚存在一定的難度，多指標(biāo)的

5、質(zhì)量控制更是受到限制?！耙粶y多評(píng)”技術(shù)的提出為解決這類問題提供了一個(gè)新的思路。目前“一測多評(píng)”技術(shù)已在黃連、丹參、吳茱萸等20多味常用中藥材的應(yīng)用中得到驗(yàn)證，其中黃連的“一測多評(píng)”方法已被2010年版《中國藥典》收錄。
　　1、“一測多評(píng)”技術(shù)在淫羊藿及復(fù)方制劑中的應(yīng)用。
　　首先，以淫羊藿藥材中淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C及寶藿苷-I為指標(biāo)，建立淫羊藿藥材中上述5個(gè)黃酮類成分的HPLC同步測定方法。采用C18色譜

6、柱，以乙腈-0.2％磷酸水溶液為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，流速1.0 mL·min-1，檢測波長270 nm，柱溫35℃。在此條件下，5種成分的分離度良好。在以下線性范圍內(nèi)0.000784～0.392μg，0.000844～0.422μg，0.000804～0.402μg，0.000784～0.392μg，0.000820～0.410μg，線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.9999。其加樣回收率為98.69％～101.7％，RSD為1.8％～2

7、.5％，表明該方法的準(zhǔn)確度良好。其次，建立了朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C及寶藿苷-I與內(nèi)參物淫羊藿苷間的相對(duì)校正因子和采用相對(duì)保留值對(duì)待測成分進(jìn)行定位的方法，分別為：f270nm朝羊藿A/淫羊藿苷=0.73，f270nm朝羊藿B/淫羊藿苷=0.80，f270nm朝羊藿定c/淫羊藿苷=0.81，f270nm寶藿苷-I/淫羊藿苷=1.37和γ朝藿定A/淫羊藿苷=0.69，γ朝藿定B/淫羊藿苷=0.78，γ朝藿定C/淫羊藿苷=0.90，γ寶藿

8、苷-I/淫羊藿苷=1.71。同時(shí)對(duì)相對(duì)校正因子的耐用性做了考察，重點(diǎn)考察了不同儀器、不同色譜柱、流速、柱溫、修飾劑等因素的微小變化對(duì)相對(duì)校正因子的影響。結(jié)果表明，在對(duì)色譜條件進(jìn)行微調(diào)的情況下，相對(duì)校正因子的重現(xiàn)性和耐用性良好(RSD<5％)。最后，分別采用外標(biāo)法和“一測多評(píng)”法測定19批淫羊藿藥材及20批炙淫羊藿中5種黃酮類成分的含量，采用相對(duì)誤差法對(duì)測定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果表明，“一測多評(píng)”法的測定結(jié)果與外標(biāo)法的測定結(jié)果無顯著差異，相對(duì)

9、誤差均<5％。說明在缺乏對(duì)照品的情況下，“一測多評(píng)”技術(shù)可以應(yīng)用于淫羊藿藥材及炙淫羊藿的多指標(biāo)質(zhì)量控制。
　　在測定的19批藥材和20批炙淫羊藿中，5種黃酮類成分含量的差異較大，即使是同一產(chǎn)地的藥材，其含量也有較大差異。19批藥材中朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷及寶藿苷.I的平均含量分別為0.91±0.30，1.21±0.47，3.72±3.85，1.85±0.91，0.62±0.40 mg·g-1；20批炙淫羊藿中上述5

10、種黃酮類成分的平均含量分別為：0.86±0.39，1.13±0.56，1.42±1.34，1.97±1.07，0.63±0.35 mg·g-1。從平均值看，淫羊藿藥材中的朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C的含量略高于炙淫羊藿中的含量，淫羊藿苷的含量略低于炙淫羊藿中的含量，而寶藿苷的含量二者基本相當(dāng)。
　　將建立的淫羊藿黃酮“一測多評(píng)”質(zhì)量評(píng)價(jià)模式直接應(yīng)用于中成藥抗骨增生膠囊的質(zhì)量評(píng)價(jià)，以朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷及寶藿苷-I作為檢測指

11、標(biāo)，方法學(xué)考察結(jié)果，其精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性、加樣回收率均符合中藥質(zhì)量分析的要求。試驗(yàn)中采用外標(biāo)法(ESM)和一測多評(píng)法(QAMS)對(duì)9批抗骨增生膠囊中上述4個(gè)黃酮類成分的含量進(jìn)行了測定，并用相對(duì)誤差法對(duì)測定結(jié)果進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果顯示，2種方法的測定結(jié)果無顯著性差異，相對(duì)誤差小于5％。結(jié)果表明，淫羊藿黃酮類成分的QAMS質(zhì)量評(píng)價(jià)模式在中成藥抗骨增生膠囊多成分同步質(zhì)量評(píng)價(jià)中的適應(yīng)性良好。在色譜條件滿足中藥質(zhì)量分析要求的前提下，該模式可直接用于

12、含淫羊藿制劑中黃酮類成分的質(zhì)量控制。
　　2、“一測多評(píng)”技術(shù)在新清寧片中的應(yīng)用。
　　將文獻(xiàn)報(bào)道的大黃蒽醌類成分的“一測多評(píng)”質(zhì)量評(píng)價(jià)模式直接應(yīng)用于中藥制劑新清寧片的質(zhì)量評(píng)價(jià)，僅采用大黃素單一對(duì)照品實(shí)現(xiàn)了對(duì)新清寧片中典型成分大黃素、大黃酸、大黃酚及大黃素甲醚等4個(gè)大黃蒽醌類成分的同步測定。通過與ESM所得結(jié)果的比較，發(fā)現(xiàn)QAMS的計(jì)算值與外標(biāo)法的實(shí)測值之間無顯著性差異，相對(duì)誤差小于5％，表明文獻(xiàn)報(bào)道的大黃蒽醌類成分間的相對(duì)