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1、目的:通過(guò)構(gòu)建大鼠原位腎移植模型,觀察缺血再灌注損傷對(duì)大鼠移植腎組織病理?yè)p傷和對(duì)腎功能的影響。探討細(xì)胞凋亡與腎缺血再灌注損傷的關(guān)系。研究丹紅注射液在腎缺血再灌注損傷中對(duì)腎臟的保護(hù)作用及可能機(jī)制。 方法:建立近交系雄性SD大鼠同基因腎移植模型。共設(shè)4個(gè)實(shí)驗(yàn)組,①假手術(shù)組(10只):剖開(kāi)腹腔后暴露腎臟,45 min后關(guān)腹。于術(shù)前72,48,24h經(jīng)尾靜脈注射生理鹽水2 ml/kg。②腎移植組(10只):行異體腎移植手術(shù),切除受體大鼠
2、雙腎后,行供腎腹主動(dòng)脈與受體腹主動(dòng)脈端-側(cè)吻合,供腎下腔靜脈與受體鼠左腎靜脈端-端吻合,供腎輸尿管與受體鼠膀胱吻合。供體、受體大鼠均于術(shù)前72,48,24h經(jīng)尾靜脈注射生理鹽水2 ml/kg。③術(shù)前丹紅注射液處理組(10只):行異體腎移植手術(shù),切除受體大鼠雙腎后,行供腎腹主動(dòng)脈與受體腹主動(dòng)脈端-側(cè)吻合,供腎下腔靜脈與受體鼠左腎靜脈端-端吻合,供腎輸尿管與受體鼠膀胱吻合。供體、受體大鼠均于術(shù)前72,48,24h經(jīng)尾靜脈注射丹紅注射液2 m
3、l/kg。④術(shù)后丹紅注射液處理組(10只):行異體腎移植手術(shù),切除受體大鼠雙腎后,行供腎腹主動(dòng)脈與受體腹主動(dòng)脈端-側(cè)吻合,供腎下腔靜脈與受體鼠左腎靜脈端-端吻合,供腎輸尿管與受體鼠膀胱吻合。供體大鼠于術(shù)前72,48,24h經(jīng)尾靜脈注射丹紅注射液2 ml/kg。受體大鼠于術(shù)前72,48,24h經(jīng)尾靜脈注射生理鹽水2 ml/kg,術(shù)后12h受體鼠經(jīng)尾靜脈注射丹紅注射液2 ml/kg。②、③、④組均為腎移植手術(shù)成功者入圍。術(shù)后24小時(shí)處死各組
4、大鼠,經(jīng)下腔靜脈取血2 ml,全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清尿素氮(BUN)、肌酐(CR)。光學(xué)顯微鏡觀察移植腎臟組織病理?yè)p傷。采用TUNEL法檢測(cè)移植腎臟細(xì)胞凋亡指數(shù)。采用免疫組化法檢測(cè)移植腎臟Bcl-2,Bax表達(dá)。 結(jié)果:1.光學(xué)顯微鏡觀察組織切片提示:①假手術(shù)組:腎小球結(jié)構(gòu)正常,腎小管管腔清晰,間質(zhì)無(wú)充血水腫。②腎移植組:腎小管明顯擴(kuò)張,上皮細(xì)胞呈空泡樣、顆粒樣變性并伴有壞死。腎小管內(nèi)見(jiàn)大量管型和壞死脫落細(xì)胞,部分細(xì)胞核固縮碎
5、裂,胞質(zhì)濃縮,小管基底膜斷裂管腔阻塞,部分腎小管結(jié)構(gòu)毀損。腎小球內(nèi)可見(jiàn)紅細(xì)胞滲出,腎間質(zhì)水腫并有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。③術(shù)前丹紅注射液處理組:腎小管上皮細(xì)胞輕度腫脹,可見(jiàn)少量壞死,腎小球結(jié)構(gòu)基本正常,間質(zhì)輕度水腫,可見(jiàn)少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。④術(shù)后丹紅注射液處理組:與腎移植組病理?yè)p傷程度相近,表現(xiàn)為腎小管擴(kuò)張明顯,上皮細(xì)胞有大量壞死。腎小管內(nèi)見(jiàn)壞死脫落細(xì)胞,部分細(xì)胞核固縮碎裂,部分腎小管結(jié)構(gòu)毀損。腎間質(zhì)水腫并有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。 2.尿素氮(
6、BUN)、肌酐(CR)檢測(cè)提示:假手術(shù)組:BUN(8.43±1.12 mmol/L)、CR(54.13±5.67 ummol/L).腎移植組:BUN(69.96±6.22 mmol/L)、CR(404.08±45.39 ummol/L)。術(shù)前丹紅注射液處理組:BUN(45.16±6.50 mmol/L)、CR(269.87±41.49 ummol/L)。術(shù)后丹紅注射液處理組:BUN(67.12±5.86 mmol/L)、CR(393.7
7、1±44.19ummol/L)。腎移植組、術(shù)前丹紅注射液處理組、術(shù)后丹紅注射液處理組血BUN、CR值均顯著高于假手術(shù)組(P<0.01);腎移植組BUN、CR值與術(shù)后丹紅注射液處理組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。術(shù)前丹紅注射液處理組BUN、CR值較腎移植組及術(shù)后丹紅注射液處理組顯著下降(P<0.01)。 3.腎移植組、術(shù)前丹紅注射液處理組、術(shù)后丹紅注射液處理組與假手術(shù)組比較,Bax陽(yáng)性表達(dá)增強(qiáng)(P<0.01),Bcl-2陽(yáng)性表
8、達(dá)增強(qiáng)(P<0.01),Bcl-2/Bax顯著下降(P<0.01),腎小管細(xì)胞調(diào)亡指數(shù)增加(P<0.01);腎移植組Bax、Bcl-2表達(dá)及Bcl-2/Bax比值與術(shù)后丹紅注射液處理組比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05);術(shù)前丹紅注射液處理組較腎移植組及術(shù)后丹紅注射液處理組,Bax陽(yáng)性表達(dá)下降(17.14%±1.65%vs35.05%士2.33%,P<0.01;17.14%±1.65%vs32.62%±2.44%,P<0.01),Bcl-
9、2陽(yáng)性表達(dá)上調(diào)(25.70%±2.45%vs16.95%±2.20%,P<0.01;25.70%±2.45%vs15.68%±1.75%,P<0.01),Bcl-2/Bax顯著上升(1.48±0.09 vs0.49±0.05,P<0.01;1.48±0.09 vs0.47±0.06,P<0.01),腎小管細(xì)胞調(diào)亡指數(shù)降低(21.18%±1.58%vs39.07%±2.57%,P<0.01;21.18%±1.58%vs38.24%±2.0
10、6%,P<0.01). 結(jié)論: 1.缺血再灌注損傷導(dǎo)致大鼠移植腎組織病理?yè)p傷,血肌酐、尿素氮明顯升高。 2.細(xì)胞凋亡參與了腎缺血再灌注損傷,Bcl-2、Bax基因參與了對(duì)腎小管細(xì)胞凋亡的調(diào)控。 3.術(shù)前受體大鼠使用丹紅注射液可以減輕腎組織病理?yè)p傷,降低肌酐、尿素氮值。術(shù)后再用藥難以在短時(shí)間內(nèi)減輕組織損傷,降低肌酐、尿素氮作用不明顯。丹紅注射液可能通過(guò)下調(diào)調(diào)亡相關(guān)基因Bax表達(dá),上調(diào)Bcl-2基因表達(dá),抑制
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