丹紅注射液對(duì)大鼠移植腎缺血再灌注損傷保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的：通過(guò)構(gòu)建大鼠原位腎移植模型，觀察缺血再灌注損傷對(duì)大鼠移植腎組織病理?yè)p傷和對(duì)腎功能的影響。探討細(xì)胞凋亡與腎缺血再灌注損傷的關(guān)系。研究丹紅注射液在腎缺血再灌注損傷中對(duì)腎臟的保護(hù)作用及可能機(jī)制。 方法：建立近交系雄性SD大鼠同基因腎移植模型。共設(shè)4個(gè)實(shí)驗(yàn)組，①假手術(shù)組（10只）：剖開(kāi)腹腔后暴露腎臟，45 min后關(guān)腹。于術(shù)前72，48，24h經(jīng)尾靜脈注射生理鹽水2 ml/kg。②腎移植組（10只）：行異體腎移植手術(shù)，切除受體大鼠

2、雙腎后，行供腎腹主動(dòng)脈與受體腹主動(dòng)脈端-側(cè)吻合，供腎下腔靜脈與受體鼠左腎靜脈端-端吻合，供腎輸尿管與受體鼠膀胱吻合。供體、受體大鼠均于術(shù)前72，48，24h經(jīng)尾靜脈注射生理鹽水2 ml/kg。③術(shù)前丹紅注射液處理組（10只）：行異體腎移植手術(shù)，切除受體大鼠雙腎后，行供腎腹主動(dòng)脈與受體腹主動(dòng)脈端-側(cè)吻合，供腎下腔靜脈與受體鼠左腎靜脈端-端吻合，供腎輸尿管與受體鼠膀胱吻合。供體、受體大鼠均于術(shù)前72，48，24h經(jīng)尾靜脈注射丹紅注射液2 m

3、l/kg。④術(shù)后丹紅注射液處理組（10只）：行異體腎移植手術(shù)，切除受體大鼠雙腎后，行供腎腹主動(dòng)脈與受體腹主動(dòng)脈端-側(cè)吻合，供腎下腔靜脈與受體鼠左腎靜脈端-端吻合，供腎輸尿管與受體鼠膀胱吻合。供體大鼠于術(shù)前72，48，24h經(jīng)尾靜脈注射丹紅注射液2 ml/kg。受體大鼠于術(shù)前72，48，24h經(jīng)尾靜脈注射生理鹽水2 ml/kg，術(shù)后12h受體鼠經(jīng)尾靜脈注射丹紅注射液2 ml/kg。②、③、④組均為腎移植手術(shù)成功者入圍。術(shù)后24小時(shí)處死各組

4、大鼠，經(jīng)下腔靜脈取血2 ml，全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清尿素氮（BUN）、肌酐（CR）。光學(xué)顯微鏡觀察移植腎臟組織病理?yè)p傷。采用TUNEL法檢測(cè)移植腎臟細(xì)胞凋亡指數(shù)。采用免疫組化法檢測(cè)移植腎臟Bcl-2，Bax表達(dá)。 結(jié)果：1.光學(xué)顯微鏡觀察組織切片提示：①假手術(shù)組：腎小球結(jié)構(gòu)正常，腎小管管腔清晰，間質(zhì)無(wú)充血水腫。②腎移植組：腎小管明顯擴(kuò)張，上皮細(xì)胞呈空泡樣、顆粒樣變性并伴有壞死。腎小管內(nèi)見(jiàn)大量管型和壞死脫落細(xì)胞，部分細(xì)胞核固縮碎

5、裂，胞質(zhì)濃縮，小管基底膜斷裂管腔阻塞，部分腎小管結(jié)構(gòu)毀損。腎小球內(nèi)可見(jiàn)紅細(xì)胞滲出，腎間質(zhì)水腫并有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。③術(shù)前丹紅注射液處理組：腎小管上皮細(xì)胞輕度腫脹，可見(jiàn)少量壞死，腎小球結(jié)構(gòu)基本正常，間質(zhì)輕度水腫，可見(jiàn)少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。④術(shù)后丹紅注射液處理組：與腎移植組病理?yè)p傷程度相近，表現(xiàn)為腎小管擴(kuò)張明顯，上皮細(xì)胞有大量壞死。腎小管內(nèi)見(jiàn)壞死脫落細(xì)胞，部分細(xì)胞核固縮碎裂，部分腎小管結(jié)構(gòu)毀損。腎間質(zhì)水腫并有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。 2.尿素氮（

6、BUN）、肌酐（CR）檢測(cè)提示：假手術(shù)組：BUN（8.43±1.12 mmol/L）、CR（54.13±5.67 ummol/L）.腎移植組：BUN（69.96±6.22 mmol/L）、CR（404.08±45.39 ummol/L）。術(shù)前丹紅注射液處理組：BUN（45.16±6.50 mmol/L）、CR（269.87±41.49 ummol/L）。術(shù)后丹紅注射液處理組：BUN（67.12±5.86 mmol/L）、CR（393.7

7、1±44.19ummol/L）。腎移植組、術(shù)前丹紅注射液處理組、術(shù)后丹紅注射液處理組血BUN、CR值均顯著高于假手術(shù)組（P<0.01）；腎移植組BUN、CR值與術(shù)后丹紅注射液處理組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。術(shù)前丹紅注射液處理組BUN、CR值較腎移植組及術(shù)后丹紅注射液處理組顯著下降（P<0.01）。 3.腎移植組、術(shù)前丹紅注射液處理組、術(shù)后丹紅注射液處理組與假手術(shù)組比較，Bax陽(yáng)性表達(dá)增強(qiáng)（P<0.01），Bcl-2陽(yáng)性表

8、達(dá)增強(qiáng)（P<0.01），Bcl-2/Bax顯著下降（P<0.01），腎小管細(xì)胞調(diào)亡指數(shù)增加（P<0.01）；腎移植組Bax、Bcl-2表達(dá)及Bcl-2/Bax比值與術(shù)后丹紅注射液處理組比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）；術(shù)前丹紅注射液處理組較腎移植組及術(shù)后丹紅注射液處理組，Bax陽(yáng)性表達(dá)下降（17.14％±1.65％vs35.05％士2.33％，P<0.01；17.14％±1.65％vs32.62％±2.44％，P<0.01），Bcl-

9、2陽(yáng)性表達(dá)上調(diào)（25.70％±2.45％vs16.95％±2.20％，P<0.01；25.70％±2.45％vs15.68％±1.75％，P<0.01），Bcl-2/Bax顯著上升（1.48±0.09 vs0.49±0.05，P<0.01；1.48±0.09 vs0.47±0.06，P<0.01），腎小管細(xì)胞調(diào)亡指數(shù)降低（21.18％±1.58％vs39.07％±2.57％，P<0.01；21.18％±1.58％vs38.24％±2.0

10、6％，P<0.01）. 結(jié)論： 1.缺血再灌注損傷導(dǎo)致大鼠移植腎組織病理?yè)p傷，血肌酐、尿素氮明顯升高。 2.細(xì)胞凋亡參與了腎缺血再灌注損傷，Bcl-2、Bax基因參與了對(duì)腎小管細(xì)胞凋亡的調(diào)控。 3.術(shù)前受體大鼠使用丹紅注射液可以減輕腎組織病理?yè)p傷，降低肌酐、尿素氮值。術(shù)后再用藥難以在短時(shí)間內(nèi)減輕組織損傷，降低肌酐、尿素氮作用不明顯。丹紅注射液可能通過(guò)下調(diào)調(diào)亡相關(guān)基因Bax表達(dá)，上調(diào)Bcl-2基因表達(dá)，抑制