膽管上皮細(xì)胞上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)變以及BMP-7的逆轉(zhuǎn)效應(yīng).pdf

1、目的：膽管上皮細(xì)胞(Biliary Epithelial Cells，BECs)是一族高氧耗、高代謝、低缺氧耐受、易受自由基損害的細(xì)胞群體。缺血性膽管病時(shí)膽管上皮損傷后的共同特征是上皮化的功能單位發(fā)生改建和纖維化，伴有上皮細(xì)胞缺失、基底膜損害和間質(zhì)纖維化。但膽管上皮細(xì)胞同膽管型纖維化之間的關(guān)系尚不清楚。本研究通過(guò)體外原代培養(yǎng)大鼠及人膽管上皮細(xì)胞(BECs)，探討經(jīng)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(TGF-β)誘導(dǎo)后，BECs能否出現(xiàn)上皮.間質(zhì)表型轉(zhuǎn)變(

2、EMT)，及其相關(guān)蛋白及分子標(biāo)志的表達(dá)變化；并探討骨形態(tài)形成蛋白-7(BMP-7)是否可以逆轉(zhuǎn)膽管上皮細(xì)胞的EMT，從而為缺血性膽管病的發(fā)生機(jī)理及治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：分離大鼠及人肝膽管上皮細(xì)胞并進(jìn)行原代培養(yǎng)。對(duì)2種細(xì)胞分別設(shè)立未處理空白對(duì)照組、誘導(dǎo)EMT組、BMP-7對(duì)EMT逆轉(zhuǎn)效應(yīng)組。通過(guò)免疫組化、免疫熒光檢測(cè)其E-cadherin、CK-19、S100A4、β-catenin、Fibronectin等標(biāo)志蛋白的表

3、達(dá)變化。
　　 結(jié)果：(1)進(jìn)行了體外分離大鼠及人膽管上皮細(xì)胞并進(jìn)行原代培養(yǎng)，細(xì)胞純度及存活率較高；(2)體外培養(yǎng)的膽管上皮細(xì)胞經(jīng)TGF-β誘導(dǎo)后，其上皮標(biāo)志E-cadherin、β-catenin、CK-19表達(dá)降低，間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志Vimentin、S100A4及Fibronectin的表達(dá)升高，出現(xiàn)EMT的特征；(3)BMP-7可在一定程度上逆轉(zhuǎn)EMT，表現(xiàn)為E-cadherin、β-catenin及CK-19表達(dá)升高，而Vi