髓源抑制性細(xì)胞與膽道閉鎖相關(guān)性研究.pdf

1、目的:
　　1.檢測膽道閉鎖患者全血及肝臟組織中MDSCs的表達(dá)情況，探尋MDSCs與膽道閉鎖之間的關(guān)系。
　　2.探索MDSCs的含量同11種細(xì)胞因子含量的關(guān)系，初步探討MDSCs在膽道閉鎖發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　方法:
　　1.病例標(biāo)本
　　全血標(biāo)本：膽道閉鎖組（BA組，n=27），其對照組分別選取非肝膽系統(tǒng)疾病組（先天性肥厚性幽門狹窄，n=2；新生兒肺炎，n=5）、先天性膽管擴張癥組（CBD組，n=2

2、7）和新生兒肝炎組（NH組，n=13）。
　　血清標(biāo)本：以上各組全血標(biāo)本部分同時留取血清標(biāo)本，膽道閉鎖組（BA組， n=18），膽總管擴張癥組（CBD，n=13），新生兒肝炎組（NH組，n=8）。
　　石蠟標(biāo)本：膽道閉鎖組（BA組，n=1），新生兒肝炎組（NH組,n=5）。冰凍標(biāo)本：擁有-80度冰箱凍存肝臟標(biāo)本，膽道閉鎖組（BA組，n=26）先天性膽管擴張癥組（CBD組, n=12）。
　　2.全血標(biāo)本中MDSCs含量

3、檢測
　　應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)檢測 BA組、非肝膽系統(tǒng)疾病組、CBD組和NH組中MDSCs的含量。檢測BA組肝臟組織病理分期早期、中晚期MDSCs的含量。檢測同一膽道閉鎖患者、新生兒肝炎患者隨年齡增長MDSCs的含量變化情況。
　　3.肝臟組織病理染色及MDSCs細(xì)胞免疫組織化學(xué)染色
　　將甲醛固定的肝臟標(biāo)本制成石蠟切片后，進(jìn)行病理染色和免疫組化檢測。病理染色采用HE染色、MASSON染色；病理分級方法根據(jù)阿克曼外科病理學(xué)

4、（第八版）膽道阻塞疾病組織學(xué)分級標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分級。免疫組織化學(xué)染色方法分別采用普通染色和雙重染色（CD33+HLA-DR-)方法對肝臟組織中的MDSCs細(xì)胞染色。
　　4.膽道閉鎖血清及肝臟組織中11種細(xì)胞因子含量檢測
　　應(yīng)用流式微球技術(shù)檢測膽道閉鎖血清及肝臟組織中11種細(xì)胞因子含量，分析MDSCs含量同細(xì)胞因子之間的關(guān)系。
　　5.統(tǒng)計
　　用SPSS.19軟件對各組全血標(biāo)本中MDSCs含量進(jìn)行分析。對各組血清標(biāo)

5、本及肝臟組織中11種細(xì)胞因子IL-12p70、IFN-γ、IL-2、IL-10、IL-8、IL-6、IL-4、IL-5、IL-1β、TNF-α、TNF-β的含量進(jìn)行比較分析。
　　結(jié)果:
　　1.全血標(biāo)本中MDSCs的表達(dá)情況
　　應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測全血標(biāo)本中MDSCs（CD33+CD11b+HLA-DR-）表達(dá)情況，其中BA組 MDSCs平均含量為9.1％±1.1%,對照組中非肝膽系統(tǒng)疾病組MDSC平均含量為2.3%

6、±0.5%，CBD組MDSCs平均含量為3.5%±0.6%，NH組MDSCs平均含量為11.3%±1.9%，BA組MDSCs含量明顯高于非肝膽系統(tǒng)疾病組和CBD組，差異存在統(tǒng)計學(xué)意義，BA組和NH組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　BA組根據(jù)肝臟組織病理分型分為早期與中晚期組，在早期組中，MDSCs平均含量為6.0%±1.2%，而在中晚期組中，MDSCs平均含量為12.1±2.2%，兩組的差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　同時還檢測了同一

7、病人不同時期 MDSCs表達(dá)，發(fā)現(xiàn)在 BA組中同一病人MDSC含量隨年齡增長逐漸升高，然而，在NH組中同一病人MDSCs含量卻隨年齡增加而呈下降的趨勢。
　　2.膽道閉鎖肝臟組織病理變化及MDSCs在肝臟組織中的表達(dá)情況
　　膽道閉鎖肝臟組織可見肝小葉內(nèi)有不同程度的肝細(xì)胞羽毛狀變性、膽酸鹽淤積，部分可見肝細(xì)胞壞死和嗜酸性小體出現(xiàn)，嚴(yán)重者可見假小葉形成。匯管區(qū)膽小管增生、膽道上皮細(xì)胞變性。以膽小管為中心，淋巴細(xì)胞和粒細(xì)胞浸潤生

8、長,不同程度的纖維束包裹膽小管。根據(jù)阿克曼外科病理學(xué)（第八版）膽道阻塞疾病組織學(xué)分級標(biāo)準(zhǔn)對膽道閉鎖患者進(jìn)行病理分級，其中早期9例，中晚期10例。免疫組化染色后，BA組肝臟組織匯管區(qū)可見到MDSCs細(xì)胞。NH組肝臟組織匯管區(qū)未見到MDSCs細(xì)胞。
　　3.血清及肝臟組織中11種細(xì)胞因子的含量
　　血清標(biāo)本：BA組中細(xì)胞因子IFN-γ、IL-2、IL-10、TNF-α含量明顯高于CBD組同種細(xì)胞因子含量，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。BA

9、組中細(xì)胞因子IFN-γ、IL-2、IL-10、IL-8、IL-6、IL-1β和TNF-β含量明顯高于NH組同種細(xì)胞因子含量，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　肝臟組織：BA組細(xì)胞因子IFN-γ較CBD組減少，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。而細(xì)胞因子IL-4較CBD組增多，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。兩種細(xì)胞因子的比值（IFN-γ/IL-4）則是BA組明顯低于CBD組，差異存在統(tǒng)計學(xué)意義。
　　4.外周血中MDSCs含量同11種細(xì)胞因子含量相關(guān)性