自體半月板碎塊法移植修復(fù)兔半月板無(wú)血運(yùn)區(qū)損傷的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：通過建立成年新西蘭大白兔半月板無(wú)血運(yùn)區(qū)損傷模型，觀察體內(nèi)自體半月板碎塊法移植修復(fù)成年兔半月板無(wú)血運(yùn)區(qū)損傷的療效。
　　方法：選取6月齡成年新西蘭大白兔32只，平均體重3.0Kg(2.6Kg～3.5Kg)雌雄不限，64膝隨機(jī)編號(hào)分為2組，每組32膝。選取外側(cè)半月板前角及體部?jī)?nèi)側(cè)2/3部位，建立1mm×4mm全層缺損模型。對(duì)照組：取出半月板組織整塊原位填塞于缺損處，并用自體肌筋膜包裹。實(shí)驗(yàn)組：取出的自體半月板加工成0.5mm×0

2、.5mm×0.5mm大小的碎塊，填塞于缺損處并用自體肌筋膜包裹。分別在術(shù)后2周、4周、8周、12周在各組隨機(jī)取出8個(gè)外側(cè)半月板標(biāo)本，進(jìn)行大體標(biāo)本觀察、組織學(xué)HE染色、PCNA免疫組化、膠原蛋白免疫組化、II型膠原蛋白免疫組化觀察，并進(jìn)行半定量評(píng)分，測(cè)定平均灰度值判斷PCNA、膠原蛋白、II型膠原蛋白表達(dá)情況。所采集的計(jì)量資料數(shù)據(jù)用x±s表示，采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)或者方差不齊的t＇檢驗(yàn)，組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)

3、數(shù)資料采用秩轉(zhuǎn)換的非參數(shù)Mann-Whitney U檢驗(yàn)或者Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。應(yīng)用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　1．大體觀察和愈合程度比較
　　在術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)標(biāo)本大體觀察結(jié)果顯示：術(shù)后2周兩組大體標(biāo)本觀察愈合情況比較，P>0.05，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；術(shù)后4周、8周、12周時(shí)兩組大體標(biāo)本觀察愈合情況比較P<0.05，有統(tǒng)

4、計(jì)學(xué)意義。Kruskal-Wallis H法對(duì)對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組在組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)的兩兩比較結(jié)果顯示：對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)的愈合程度比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P>0.05,而實(shí)驗(yàn)組的愈合程度隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，P<0.05,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2．組織評(píng)估
　　2.1、HE染色
　　組織學(xué)半定量得分：術(shù)后2周時(shí)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較，P＞0.05。術(shù)后4周、8周、12周時(shí)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較，P<0.05，兩組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Mann-Whi

5、tney U檢驗(yàn)法在術(shù)后2周實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較，P＞0.05。術(shù)后4周、8周、12周時(shí)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較，均P<0.05，兩組之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)法對(duì)對(duì)照組組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)的比較，雖然標(biāo)本得分隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，但P＞0.05，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)法在實(shí)驗(yàn)組組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)的比較：標(biāo)本得分隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而增加，P<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　3、增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）

6、、I型膠原蛋白和II型膠原蛋白免疫組化評(píng)估細(xì)胞增殖、生物活性
　　3.1、PCNA免疫組化
　　PCNA免疫組化平均灰度值比較：術(shù)后2、4、8周實(shí)驗(yàn)組平均灰度值與對(duì)照組比較，P<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而術(shù)后12周實(shí)驗(yàn)組平均灰度值與對(duì)照組比較， P>0.05，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。對(duì)照組術(shù)后2周PCNA免疫組化平均灰度值與術(shù)后12周比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.224），其余各時(shí)間點(diǎn)PCNA免疫組化平均灰度值兩兩比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜

7、0.05；術(shù)后實(shí)驗(yàn)組各時(shí)間點(diǎn)PCNA免疫組化平均灰度值兩兩比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05。
　　3.2、I型膠原蛋白免疫組化
　　I型膠原蛋白免疫組化平均灰度值比較：術(shù)后2、4、8、12周實(shí)驗(yàn)組I型膠原蛋白免疫組化平均灰度值分別與對(duì)照組比較，P<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；對(duì)照組術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)I型膠原蛋白免疫組化平均灰度值兩兩比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05；實(shí)驗(yàn)組術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)I型膠原蛋白免疫組化平均灰度值比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜

8、0.05。
　　3.3、II型膠原蛋白免疫組化
　　II型膠原蛋白免疫組化平均灰度值比較：術(shù)后2、4、8、12周實(shí)驗(yàn)組II型膠原蛋白免疫組化平均灰度值分別與對(duì)照組比較，P<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；對(duì)照組術(shù)后8周II型膠原蛋白免疫組化平均灰度值與術(shù)后12周比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.071），其余術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)II型膠原蛋白免疫組化平均灰度值兩兩比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05；實(shí)驗(yàn)組術(shù)后8周II型膠原蛋白免疫組化平均灰度值與術(shù)后