澤黃顆粒對實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠腎損害的治療效應(yīng)研究.pdf

1、DM是一種嚴(yán)重威脅人類健康的終身性、全身性疾病，且其發(fā)病率呈逐年遞升的趨勢。WHO報(bào)告稱，1995年全世界DM患者將近1.25億，預(yù)計(jì)至2025年全世界DM患者將達(dá)至2.99億。DN為DM最嚴(yán)重、最常見的慢性并發(fā)癥之一，也是DM患者主要的死亡原因。針對DN這一嚴(yán)重的、難治的DM微血管并發(fā)癥，對其進(jìn)行有效防治已成為醫(yī)學(xué)界亟待解決的臨床課題。澤黃顆粒是基于血瘀是DN的基本病理基礎(chǔ),并結(jié)合臨床經(jīng)驗(yàn)所研制的以化瘀利水法為主方的中藥制劑。臨床觀察

2、證實(shí)，該藥在改善早期DN患者的水腫、血液流變學(xué)等癥狀、降低BUN、Scr等指標(biāo)有較好療效。為了進(jìn)一步研究澤黃顆粒的臨床效應(yīng)機(jī)制，我們借助于免疫組織化學(xué)法、Real-timePCR法、Western-Blot法、ELASA法、病理學(xué)等研究手段，探討澤黃顆粒對DN的保護(hù)效應(yīng)及其機(jī)制，為該制劑的臨床應(yīng)用、開發(fā)與推廣提供藥理學(xué)證據(jù)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)告如下：
　　實(shí)驗(yàn)一：澤黃顆粒對實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠的藥效學(xué)觀察
　　目的：探討澤

3、黃顆粒對STZ致DM大鼠腎損傷的保護(hù)機(jī)制及其對一般藥效學(xué)指標(biāo)和血液流變學(xué)指標(biāo)的調(diào)節(jié)效應(yīng)。
　　方法：4周齡SPF級雄性Sprague-Dawlay（SD）大鼠共50只，體重為180-200g，隨機(jī)分為正常組10只，糖尿病模型組40只。正常組進(jìn)食普通飼料；糖尿病模型組進(jìn)食高脂高糖飼料，在高脂高糖飼料喂養(yǎng)4周后以45mg/kg體重一次性空腹腹腔注射STZ，72h后監(jiān)測血糖，以連續(xù)3次空腹血糖≥16.7mmol/L，尿糖陽性，尿微量白蛋

4、白定性測量陽性者為糖尿病模型制備成功，造模成功大鼠35只，隨機(jī)分為糖尿病模型組（DM組）12只、澤黃顆粒治療組（Z組）12只、格列吡嗪對照組（G組）11只。用普通光鏡和透射電鏡觀察各組大鼠腎組織病理變化，并測定各組大鼠BG、Hbalc、Scr、Ucr、BUN、UAER、TG、TC及血液流變學(xué)指標(biāo)。
　　結(jié)果：DM組大鼠均出現(xiàn)明顯多飲、多食、多尿，且早期體重有所增加，后期一般情況變差，體重下降，皮毛無光澤，刺毛現(xiàn)象明顯，易感染，BG

5、、Hba1c、BUN、UAER、TG、TC、左腎重/體重、全血黏度、血漿黏度均明顯高于N組大鼠，且Ccr明顯低于N組大鼠（均P<0.05）。Z組和G組大鼠的BG、Hba1c、BUN、UAER、TG、TC、左腎重/體重、全血黏度、血漿黏度較DM組均顯著下降（均P<0.05），其中與G組相比，Z組下降更明顯（P<0.05）。Z組和G組大鼠Ccr較DM組均明顯升高，與G組相比，Z組下降升高更明顯。
　　HE染色觀察到，N組大鼠腎小球結(jié)構(gòu)

6、清晰，腎小管上皮細(xì)胞排列整齊，基底膜完整，腎間質(zhì)中未見炎癥細(xì)胞浸潤和纖維組織增生；DM組大鼠腎小球肥大，系膜區(qū)增寬，系膜細(xì)胞增生，球內(nèi)可見大量紅細(xì)胞淤積，腎小管上皮細(xì)胞腫脹脫落，呈空泡樣變性；Z組大鼠腎小球內(nèi)少見紅細(xì)胞淤積，腎小管未見上皮細(xì)胞脫落，小管內(nèi)少見蛋白管型。G組大鼠腎小球內(nèi)可見紅細(xì)胞淤積的情況，上皮細(xì)胞空泡狀變性呈片狀，腎小管偶見上皮細(xì)胞脫落。
　　透射電鏡觀察到，N組大鼠腎小球結(jié)構(gòu)正常，足突分布均勻，裂孔膜結(jié)構(gòu)清晰；D

7、M組大鼠可見基底膜增厚，系膜區(qū)明顯增寬，系膜細(xì)胞和基質(zhì)彌漫增寬，足突腫脹，部分小節(jié)段融合，局部裂孔膜減少消失；Z組及G組大鼠較DM組有所減輕，表現(xiàn)為系膜區(qū)增寬減輕，足突融合減輕，裂孔膜大部恢復(fù)。
　　實(shí)驗(yàn)二：澤黃顆粒對實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠腎臟AQP1、AQP2和尿液AQP2表達(dá)的調(diào)節(jié)效應(yīng)
　　目的：觀察澤黃顆粒對糖尿病大鼠腎臟AQP1、AQP2和尿液AQP2表達(dá)的調(diào)節(jié)效應(yīng)。
　　方法：動(dòng)物造模方法同前。采用免疫組織化學(xué)、W

8、estern-Blot、Real-timePCR檢測各組大鼠AQP1、AQP2蛋白和基因在腎臟的分布和表達(dá)水平，采用ELASA法檢測大鼠尿液中AQP2的濃度。
　　結(jié)果：AQP1在腎皮質(zhì)內(nèi)的近端小管和髓袢降支細(xì)段的細(xì)胞頂膜面均有表達(dá)，腎小球內(nèi)無表達(dá)。四組大鼠腎臟AQP1蛋白和mRNA表達(dá)水平均無明顯變化（均P>0.05）。
　　AQP2蛋白在腎集合管、遠(yuǎn)端小管表達(dá)，而在腎小球內(nèi)未見表達(dá)，Z組大鼠較DM組大鼠腎臟AQP2蛋白、

9、mRNA表達(dá)水平和尿液AQP2濃度均明顯降低（P<0.05）；腎臟AQP2蛋白含量與尿液AQP2濃度呈正相關(guān)（r=0.703，p<0.01）。
　　實(shí)驗(yàn)三澤黃顆粒對實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠腎臟足細(xì)胞相關(guān)蛋白Nephrin、Podocin表達(dá)的調(diào)節(jié)效應(yīng)
　　目的：觀察澤黃顆粒糖尿病大鼠腎臟足細(xì)胞相關(guān)蛋白Nephrin、Podocin表達(dá)的調(diào)節(jié)效應(yīng)。
　　方法：動(dòng)物造模方法同前。采用免疫組織化學(xué)、Western-Blot、Real

10、-timePCR檢測各組大鼠Nephrin、Podocin蛋白和基因在腎臟的分布及表達(dá)水平。
　　結(jié)果：nephrin、podocin表達(dá)于腎小球裂孔膜位置，沿腎小球毛細(xì)血管襻呈均勻線狀分布,腎小管及腎小囊無表達(dá)。Z組大鼠較DM組大鼠nephrin、podocin蛋白、mRNA表達(dá)水平均明顯升高（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、澤黃顆粒能降低BG、Hba1c、BUN、UAER、TG、TC、左腎重/體重、全血黏度、

11、血漿黏度等指標(biāo)，較好地緩解了糖尿病大鼠的多飲、多食、多尿等癥狀，并可使其體重穩(wěn)定增加，改善了DM大鼠的狀態(tài)。
　　2、澤黃顆?？山档虳M大鼠腎組織AQP2蛋白和mRNA的表達(dá)，可能是其“利水”藥理效應(yīng)的部分機(jī)制；澤黃顆粒亦可明顯減少DM大鼠的尿量和尿液AQP2的濃度，且各組大鼠腎臟AQP2蛋白含量與尿液AQP2濃度呈正相關(guān)。并同時(shí)在我院建立了尿液AQP2的檢測方法，為揭示DM中醫(yī)“瘀水病證”本質(zhì)與“化瘀利水”法研究提供了新的臨床檢