褪黑素通過調(diào)節(jié)急性胰腺炎大鼠外周血單個核細胞p38與NF-κB通路改變細胞因子的產(chǎn)生.pdf

1、目的：
　　研究和探討褪黑素對急性胰腺炎大鼠模型的保護作用以及其可能的保護機制。
　　方法：
　　1.將48只雄性SD大鼠隨機分成四組，分別為假手術(shù)組(sham operation，SO)，急性胰腺炎組(severe acute pancreatitis，SAP)，褪黑素治療組(melatonintreatment，MLT)和p38抑制劑(SB203580)治療組(SB)。
　　2.誘導大鼠SAP:通過腹腔注射4

2、％水合氯醛（0.7-0.8ml/kg）麻醉大鼠，打開腹腔后，采用逆行胰膽管注射牛黃膽酸鈉造模。SO組翻動胰腺、十二指腸數(shù)次，SAP組緩慢勻速推注5％?；悄懰徕c(0.1ml/100g)，MLT組在誘導SAP前30min經(jīng)腹腔注射4％MLT(50mg/kg)，SB組在誘導SAP前30min經(jīng)尾靜脈注射0.5mg/kg SB203580，造模成功后逐層關(guān)腹，并于大鼠背部皮下分點注射2.0ml生理鹽水以補充水分。
　　3.造模成功后的6小

3、時與12小時分別通過抽取腹主動脈血處死每組六只大鼠，隨后立即用大鼠外周血單個核細胞分離液分離所采集血液中的單個核細胞(PBMCs)并檢測血液中血淀粉酶濃度和腫瘤壞死因子(TNF-α)、白介素-1（IL-1）、白介素-6(IL-6)的表達（ELISA法），同時立刻取下部分胰腺組織用4％多聚甲醛固定待做病理檢查（HE染色法）。PBMCs中的p38與NF-κB的表達通過蛋白免疫印跡法(Western blot)測定。
　　結(jié)果：

4、　　1.成功建立大鼠急性胰腺炎(SAP)模型
　　2.胰腺組織病理
　　與SO組大鼠比較，SAP組大鼠在6小時與12小時胰腺組織都表現(xiàn)出不同程度的組織病理損傷，并且隨著時間推移損傷程度逐漸加重，MLT組與SB組大鼠胰腺組織與同時間點SAP組大鼠比較組織損傷程度顯著減輕(P＜0.01)。
　　3.血淀粉酶濃度與細胞因子表達
　　SAP組在兩個時間點同SO組比較，血淀粉酶濃度都顯著升高(P＜0.01)，并且隨著時間推

5、移進行性加重。MLT組與SB組血淀粉酶濃度與相對應(yīng)時間點SAP組比較顯著降低(P＜0.01)。同樣的，TNF-α、IL-1、IL-6在SAP組中的表達較相應(yīng)SO組明顯升高(P＜0.01)，而MLT組與SB組血中各細胞因子表達與相對應(yīng)時點SAP組比較受到顯著抑制(P＜0.01)。
　　4.外周血單個核細胞p38與NF-κB的表達
　　SO組表達相對較少的磷酸化p38與磷酸化NF-κB，造模成功后6小時與12小時SAP組的磷酸化

6、p38與磷酸化NF-κB表達顯著提高(P＜0.01)，MLT組與SB組同SAP組比較在兩個時間點均顯著抑制了p38的磷酸化，MLT組與SAP組比較，在各時間點均有效抑制NF-κB的磷酸化，SB組與SAP組比較在12小時顯著抑制NF-κB的磷酸化，然而在6小時未能顯著減少NF-κB的磷酸化。
　　結(jié)論：
　　1.急性胰腺炎能上調(diào)TNF-α、IL-1、IL-6的表達，并能被褪黑素與P38抑制劑顯著抑制。
　　2.急性胰腺炎