苦瓜皂甙的分離純化及其指紋圖譜的建立.pdf

1、苦瓜(MomordicacharantiaL.)是葫蘆科(Cucurbitaceae)苦瓜屬(Momordica)植物，因其果實(shí)具有特殊苦味而得名?？喙闲院犊啵哂星鍩峤舛?、滋養(yǎng)強(qiáng)壯、降血糖、抑菌、抗腫瘤以及提高人體免疫力等功效，同時(shí)也是人們喜愛(ài)的蔬菜之一，具有藥食兩用的功能。本文對(duì)苦瓜中活性成分苦瓜皂甙進(jìn)行了分離純化，并對(duì)其指紋圖譜進(jìn)行了研究，內(nèi)容如下： 采用大孔吸附樹(shù)脂對(duì)苦瓜皂甙進(jìn)行了分離純化，選擇了極性不同、孔徑、比表面

2、積各異的五種大孔吸附樹(shù)脂，比較其對(duì)苦瓜皂甙的吸附量、吸附率、解吸率及靜態(tài)動(dòng)力吸附曲線等指標(biāo)，篩選出較優(yōu)的一種樹(shù)脂并對(duì)其相關(guān)條件下的動(dòng)態(tài)吸附和解吸性能進(jìn)行研究。結(jié)果表明：AB-8大孔吸附樹(shù)脂對(duì)苦瓜皂甙有較好的吸附和解吸性能，最佳洗脫劑為80％的乙醇溶液。當(dāng)層析柱規(guī)格為2×60cm時(shí)，最佳工藝參數(shù)為：pH6-7下，上樣液濃度15mg/mL、上樣速度為2.5mL/min，用6BV(柱床體積)體積分?jǐn)?shù)為80％的乙醇溶液基本可將苦瓜皂甙完全洗脫下

3、來(lái)，解吸率為90.7％。將所得洗脫液濃縮、冷凍干燥，比色法測(cè)得其皂甙含量為63.2％。 將AB-8樹(shù)脂純化后的總皂甙進(jìn)行硅膠柱層析，用不同極性氯仿和甲醇的洗脫劑進(jìn)行梯度洗脫，得到兩組分。對(duì)這兩組分進(jìn)行重復(fù)硅膠柱層析并結(jié)晶，得到兩種物質(zhì)記為a和b，對(duì)其分別作Libermann-Buehard試驗(yàn)和泡沫試驗(yàn)，由試驗(yàn)結(jié)果定性為皂甙。用與苦瓜皂甙結(jié)構(gòu)相似的人參皂甙Rg1作對(duì)照，在相同的色譜條件下，這兩種物質(zhì)的出峰時(shí)間與之相近，進(jìn)一步推斷

4、為苦瓜皂甙，在展開(kāi)劑條件為氯仿：甲醇為8:1時(shí)，Rf值分別為0.43和0.16。 為了能從整體上反映苦瓜皂甙的種類(lèi)，對(duì)不同產(chǎn)地的苦瓜進(jìn)行了HPLC指紋圖譜研究，并采用HPLC-UV法確定了最佳色譜分析條件，即色譜柱：ZorbaxSB-C18柱(150×4.6mm，5μm)；柱溫：25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：209nm；流速：1.0mL/min；進(jìn)樣量：20μL；流動(dòng)相：水(A)和乙腈(B)梯度洗脫：O～15min，A:70％～98％，B:

5、2％～30％；15～55min，A:40％～70％，B:30％～60％；55～65min，A:20％～40％，B:60％～80％；分析時(shí)間：65min。以色譜圖中面積相對(duì)較大、比較穩(wěn)定的、出峰時(shí)間在42.058min左右的物質(zhì)峰作為參照峰對(duì)苦瓜皂甙指紋圖譜進(jìn)行了分析，確定了8個(gè)共有峰，并對(duì)指紋圖譜進(jìn)行了相似度計(jì)算，并生成了對(duì)照指紋圖譜，獲得了滿意的結(jié)果。所建立的HPLC指紋圖譜具有較大的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性，該研究為苦瓜的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供了一種手