根據(jù)細(xì)胞周期序貫聯(lián)合免疫抑制劑對(duì)腎小球疾病影響的研究.pdf

1、目的：1．建立阿霉素腎病大鼠模型，目的為建立臨床表現(xiàn)和病理特點(diǎn)與人類腎小球疾病相似的大鼠模型。2．將免疫抑制劑根據(jù)細(xì)胞周期序貫組合成不同的方案，應(yīng)用于阿霉素腎病大鼠模型，觀察腎臟病理改變、24小時(shí)尿蛋白定量、血生化指標(biāo)的變化，以及對(duì)足細(xì)胞相關(guān)因子、腎組織纖維化相關(guān)因子的影響，并探討其作用機(jī)理，為臨床上聯(lián)合應(yīng)用免疫抑制劑治療腎小球疾病提供新思路。3．比較環(huán)孢素A與霉酚酸酯序貫及聯(lián)合用藥對(duì)阿霉素腎病大鼠的影響。4．建立根據(jù)細(xì)胞周期序貫聯(lián)合使

2、用免疫抑制劑治療腎小球疾病的臨床方案，進(jìn)行病例收集，觀察臨床療效。
　　 方法：1．采用首次大劑量（6mg/kg）沖擊誘導(dǎo)，一周后小劑量（4mg/kg）給藥的方法建立FSGS 腎病大鼠模型；以麗春紅S 法檢測(cè)24h 尿蛋白定量；全自動(dòng)生化儀檢測(cè)血清總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、膽固醇（Chol）、甘油三酯（TG）、尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）的變化；光鏡、電鏡觀察腎臟病理變化；雙抗體夾心ELISA 方法檢測(cè)血清基質(zhì)金屬

3、蛋白酶2（MMP-2）、基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP-9）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1（TGF-β1）；免疫組化方法檢測(cè)纖維連接蛋白（FN）、層粘連蛋白（LN）和結(jié)締組織生長(zhǎng)因子（CTGF）的表達(dá)。2．設(shè)正常對(duì)照組（8只）、腎病組（8只）、MP+CsA+MMF 治療組（8只）、MP+CsA+CTX 治療組（8只）和MP+FK506+Rapa 治療組（8只）；以麗春紅S 法檢測(cè)24h尿蛋白定量，全自動(dòng)生化儀檢測(cè)血清TP、ALB、Chol、TG、BUN

4、、Scr；光鏡觀察腎組織病理變化；雙抗體夾心ELISA 方法檢測(cè)血清MMP-2、MMP-9、TGF-β1；Westernblot方法檢測(cè)CTGF的表達(dá)；免疫組化、免疫熒光和實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR 檢測(cè)足細(xì)胞nephrin、podocin和CD2 相關(guān)蛋白的表達(dá)。3．設(shè)正常對(duì)照組（8只）、腎病組（8只）、MP+CsA+MMF序貫治療組（8只）、MP+CsA+MMF 聯(lián)合治療組（8只）；以麗春紅S 法檢測(cè)24h 尿蛋白定量；全自動(dòng)生化儀檢

5、測(cè)血清TP、ALB、Chol、TG、BUN、Scr及丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）；光鏡觀察肝、腎組織病理變化。4．在臨床上收集行腎穿刺活檢術(shù)后明確為原發(fā)性腎小球疾病的病理類型，臨床表現(xiàn)為腎病綜合征，對(duì)激素依賴或抵抗的患者入組，根據(jù)個(gè)體情況選擇序貫治療方案，監(jiān)測(cè)尿液分析和紅細(xì)胞位相、24h 尿蛋白定量，及血清TP、ALB、Chol、TG、ALT、AST、BUN、Scr，血藥濃度等并跟蹤隨訪，觀察療效。

6、　　 結(jié)果：1．造模組大鼠24h 尿蛋白定量進(jìn)行性增加8周末達(dá)高峰。造模組大鼠在2周末、4周末、8周末和12周末與對(duì)照組相比，TP、ALB 隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸降低，TP在8周末最低；TG、Chol 隨時(shí)間逐漸升高，TG在8周末最高；BUN、Scr 無(wú)明顯變化。造模組在12周末可見部分腎小球出現(xiàn)局灶節(jié)段性硬化。造模組隨著時(shí)間延長(zhǎng)，血清中TGF-β1的含量升高，4周末達(dá)高峰；MMP-2、MMP-9 逐漸降低；腎組織FN、LN和CTGF的表達(dá)和

7、分布范圍均顯著增加。2．腎病組24h 尿蛋白定量與對(duì)照組比較，2周末、4周末、8周末、12周末均明顯高于對(duì)照組（P<0.01），三治療組大鼠24h 尿蛋白定量在8周末、12周末均明顯低于腎病組（P<0.05），治療組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05），但高于對(duì)照組。腎病組TP、ALB 明顯低于對(duì)照組（P<0.01），腎病組TG、Chol 明顯高于對(duì)照組（P<0.01），治療組TP、ALB 明顯高于腎病組（P<0.05），治療組TG、Cho

8、l 明顯低于腎病組（P<0.05），治療組之間各生化指標(biāo)均無(wú)顯著差異。治療組腎臟病理較腎病組有所改善。三組治療方案均可降低大鼠血清中TGF-β1的含量，增加MMP-2和MMP-9的含量，同時(shí)抑制CTGF蛋白的表達(dá)，其中尤其以MP+FK506+Rapa組合方案抑制纖維化效果顯著。腎病組大鼠nephrin和podocin蛋白及其mRNA的表達(dá)均明顯減少，實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR 檢測(cè)CD2APmRNA也明顯減少；三治療組nephrin、po

9、doein和CD2AP的表達(dá)和分布均有所恢復(fù)。3．比較CsA和MMF聯(lián)合和序貫用藥方案，兩者均可有效減低腎病大鼠的尿蛋白；均可升高TP和ALB，減少TG和Chol；改善腎病大鼠的腎臟病理；但聯(lián)合用藥組對(duì)腎病大鼠產(chǎn)生肝毒性。
　　 結(jié)論：1．造模組在12周末可見部分腎小球出現(xiàn)局灶節(jié)段性硬化。2．根據(jù)細(xì)胞周期序貫用藥方案對(duì)阿霉素腎病大鼠的病理變化均有顯著改善，可以有效減少阿霉素腎病大鼠的尿蛋白；升高TP和ALB，減少TG和Chol；