載脂蛋白M表達(dá)及其啟動(dòng)子基因多態(tài)性與冠心病及其相關(guān)因素的關(guān)聯(lián)性分析.pdf

1、目的：通過病例-對(duì)照研究，闡明載脂蛋白M（Apolipoprotein M，apoM）在冠心病發(fā)展中的作用及其與相關(guān)脂蛋白的關(guān)聯(lián)性；通過限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性聚合酶鏈反應(yīng)（PCR-RFLP）病例篩查冠心病病人與對(duì)照組apoM啟動(dòng)子區(qū)域多態(tài)性，揭示其與冠心病發(fā)病的關(guān)聯(lián)；通過對(duì)比分析野生型和突變型 apoM啟動(dòng)子-熒光素酶報(bào)告基因表達(dá)變化，揭示啟動(dòng)子區(qū)域多態(tài)性對(duì)于apoM表達(dá)的影響。從而闡明apoM啟動(dòng)子突變?cè)诠谛牟“l(fā)病及相關(guān)因素中的作用。<

2、br>　　方法：篩選88例經(jīng)冠脈造影確認(rèn)的冠心病患者和88例健康對(duì)照，利用ELISA技術(shù)檢測(cè)血清apoM及相關(guān)血脂水平，將病例組分為 SAP組和 ACS組并根據(jù) CAD患者冠脈狹窄程度對(duì)兩組患者進(jìn)行Gensini積分積分；PCR-RFLP技術(shù)篩查apoM近端啟動(dòng)子rs805296、rs9404941單核苷酸多態(tài)性進(jìn)行基因分型，計(jì)算等位基因在病例組與對(duì)照組中的頻率，并進(jìn)行Hardy-weinberg平衡吻合度檢測(cè)，以確定選取的單核苷酸多態(tài)

3、性（Single Nucleotide Polymorphism，SNP）位點(diǎn)在病例組與對(duì)照組中的遺傳平衡狀態(tài)；構(gòu)建包含apoM基因啟動(dòng)子野生型、rs805296位點(diǎn)突變型、rs9404941位點(diǎn)突變型和雙突變型的熒光素酶報(bào)告基因表達(dá)載體，瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞，檢測(cè)熒光素酶表達(dá)活性。
　　結(jié)果：冠心病患者血清apoM為9.58±4.30μg/ml，而正常人為12.22±6.59(P<0.05)。apoM與血清HDL-C水平呈正相

4、關(guān)(r=0.752， P=0.000)，而與TG、LDL-C及FPG呈負(fù)相關(guān)，分別為(r=-0.222， P=0.038)，(r=-0.533， P=0.00)，(r=-0.628， P=0.000)，多元回歸線性分析表明與HDL-C關(guān)系最為密切。rs805296（SNP T-778C）、rs9404941（T-855C）與冠心病的發(fā)生及病情的嚴(yán)重程度相關(guān)。冠心病病人中SNPT-778C CT/CC基因型為27.63％而對(duì)照組為10.5

5、2%（P<0.05），C等位基因頻率明顯高于對(duì)照組（14.20比5.11%P<0.05，OR=3.290，95%CI1.487-7.280）TT基因型Gensini經(jīng)自然對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后積分顯著低于 TC/CC基因型（3.38±1.18 VS4.20±0.67，P=0.001，OR=1.00695%CI=0.998-1.014）。而SNPT-855C CT/CC基因型為9.09%而對(duì)照組為3.85%（P<0.05），C等位基因頻率明顯高于對(duì)照

6、組（17.05%比5.68%P<0.05，OR=3.206，95%1.139-2.204）。TT基因型Gensini經(jīng)自然對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后，積分顯著低于TC/CC基因型（3.32±1.08VS4.17±1.16，P=0.002，OR=1.015，95%CI=1.006-1.025）。成功構(gòu)建四種包含不同apoM基因啟動(dòng)子單體型的熒光素酶報(bào)告基因表達(dá)載體。在轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞后，熒光素酶相對(duì)活性檢測(cè)結(jié)果提示rs805296、rs9404941所