“shotgun”蛋白質組學策略解決若干生物工程問題研究.pdf

1、本文嘗試運用"shotgun"蛋白質組學研究技術和策略解決生物工程中的問題.首先將蛋白質組學應用于抗生素代謝途徑的研究；其次將蛋白質組學應用于腫瘤生物標志物和潛在藥物靶標的尋找；在此基礎上,引入<'18>O同位素標記技術,定量地考察K562細胞調亡過程中蛋白質組的變化.結果如下: 運用2D LC-MS/MS分析了藤黃灰鏈霉菌抗生素生產期菌株103和cnnl的總蛋白,分別得到726和809個蛋白.運用生物信息學手段,結合實驗室研究

2、結果,將所有可能的代謝途徑關鍵酶在所構建的數據庫中進行搜索,兩個菌株中均發(fā)現(xiàn)有聚酮合成途徑的關鍵酶聚酮合成酶和其它幾個與該途徑相關的酶,說明麥拓萊霉素通過聚酮合成途徑合成.結合β-酮酯酰合酶的抑制劑實驗結果,說明以上結論的正確性.展示了蛋白組學在尋找生物合成途徑方面的價值. 基于"shotgun"、一維凝膠電泳預分離策略,分離鑒定了K562細胞總蛋白提取物,得到1707個蛋白.運用生物信息學手段,對腫瘤生物標志物和藥物靶標進行了

3、預測,表明MLL3、SET、DEK、Stathmin、Nucleophosmin等蛋白可能為潛在的生物標志物或治療腫瘤和白血病的藥物作用靶點.通過亞細胞分級、一維凝膠電泳、串聯(lián)質譜分析了K562細胞核蛋白質,共鑒定了334個蛋白.其中檢測到了與腫瘤發(fā)生、發(fā)展、診斷相關的重要基因產物,包括NF45protein、PIBF1、DDX48、IKAP等蛋白,提供了可深入研究的腫瘤相關分子靶標. 采用180同位素標記法定量比較了多烯紫杉醇