多重聚合酶鏈反應(yīng)對真菌性角膜炎快速診斷及菌屬鑒定的探索.pdf

1、鄭州大學(xué)碩士學(xué)位論文多重聚合酶鏈反應(yīng)對真菌性角膜炎快速診斷及菌屬鑒定的探索姓名：楊子建申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：眼科學(xué)指導(dǎo)教師：王麗婭20060520鄭州大學(xué)2006屆碩士研究生論文多重PcR對真菌性角膜炎快速診斷及菌屬鑒定的探索(摘要)體系的可靠性。結(jié)果：經(jīng)過多重PcR體系擴(kuò)增后，瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果鐮孢菌屬、曲霉菌屬、牽連青霉菌和新月彎孢菌擴(kuò)增出了長度分別為360bp、430bp、245bp和300bp的條帶。人基因組DNA及其他眼部常

2、見的致病微生物DNA則未擴(kuò)增出條帶。表明本體系具有高度的特異性。PCR靈敏度研究中，鐮孢菌、曲霉菌、青霉菌、彎孢菌質(zhì)粒DNA1ng一10fg的6個質(zhì)量濃度的模板加入反應(yīng)體系中進(jìn)行擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物在瓊脂糖凝膠電泳下觀察，結(jié)果顯示10喀的DNA濃度擴(kuò)增出了目的條帶而1fg的DNA濃度為陰性因此，該多重PCR體系的靈敏度為10fg。42例臨床培養(yǎng)真菌用多重PCR體系鑒定，其中包括鐮孢菌28例，曲霉菌11例，青霉菌2例，彎孢菌1例。鑒定結(jié)果鐮孢菌

3、，曲霉菌及彎孢菌和培養(yǎng)結(jié)果一致，2株青霉菌中1例鑒定結(jié)果與培養(yǎng)結(jié)果一致而1例未能擴(kuò)增出目的條帶。結(jié)果表明本多重PcR體系具有高度的特異性。臨床標(biāo)本檢測：86例臨床角膜刮片標(biāo)本，分別用KOH涂片法、多重PCR體系和真菌培養(yǎng)法鑒定。KoH涂片法檢測陽性46例，陽性率為535％；多重PCR法檢測陽性60例，陽性率為698％；真菌培養(yǎng)法陽性59例，陽性率為686％。經(jīng)x2檢驗(yàn)，真菌培養(yǎng)法及多重PcR法的陽性率與KOH涂片法陽性率的差別有統(tǒng)計學(xué)意