非酒精性脂肪肝大鼠瘦素、腫瘤壞因子α、脂聯(lián)素的變化及意義.pdf

1、目的：通過高脂飲食制備大鼠非酒精性脂肪肝模型，動(dòng)態(tài)觀察瘦素，脂聯(lián)素在非酒精性脂肪肝大鼠血清及肝組織勻漿的變化，初步探討脂肪因子瘦素、腫瘤壞死因子-α、脂聯(lián)素在非酒精性脂肪肝的發(fā)病及發(fā)展過程中的作用。 方法：雄性SD大鼠40只，清潔級(jí)，體重150-190克，將動(dòng)物按隨機(jī)表隨機(jī)分為二組：對(duì)照組10只，模型組30只。對(duì)照組大鼠給與普通飼料喂養(yǎng)，模型組大鼠給與高脂喂養(yǎng)(88％普通飼料，10％豬油，2％膽固醇)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物自由進(jìn)食和飲水，分

2、籠喂養(yǎng)，每籠5只，室溫18-22℃，相對(duì)濕度55-70％，自由采光，保持實(shí)驗(yàn)室空氣流通。實(shí)驗(yàn)后分別于8周末，12周末處死5只對(duì)照組大鼠和10只模型組大鼠，剩余10只于16周末處死。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處死前隔夜禁食，用氯胺酮腹腔注射麻醉，頸總動(dòng)脈采血，迅速取出肝臟稱重，并從肝右葉切取小塊肝臟組織用10％r扣性福爾馬林固定制備石蠟切片，取相同部位肝組織放置-70℃冰箱集中制備肝組織勻漿。檢測(cè)所有動(dòng)物體重，肝重，血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門氨酸

3、氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)。肝臟組織常規(guī)石蠟包埋，切片，HE染色觀察肝臟組織病理學(xué)變化，酶聯(lián)免疫法檢測(cè)血清中和肝組織勻漿中瘦素、脂聯(lián)素、腫瘤壞死因子-α的變化。統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件，數(shù)據(jù)用均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差表示。組間比較采用t檢驗(yàn)、非參數(shù)檢驗(yàn)，兩因素之間的相關(guān)分析用直線回歸求相關(guān)系數(shù)。p<0.05有意義。 結(jié)果：模型組8周時(shí)呈現(xiàn)單純性脂肪肝伴有輕微匯管區(qū)炎細(xì)胞浸潤(rùn)，12周，16周時(shí)伴有肝

4、細(xì)胞氣球樣變，小葉內(nèi)混合性炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)以及散在點(diǎn)狀壞死。與對(duì)照組相比，模型組8周，12周時(shí)大鼠體重，肝指數(shù)顯著性升高，血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)顯著性升高。血清天門氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)有升高趨勢(shì)，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，總膽固醇(TC)在12周時(shí)顯著升高。甘油三酯(TG)與對(duì)照組無差異。血清中瘦素對(duì)照組為213.5±318.8pg/ml，模型組8周2697.7±1080pg/ml、12周1963.1±1558.9 pg/ml。與對(duì)照組相

5、比，模型8周，12周時(shí)顯著性升高，p<0.05。在肝臟組織勻漿中，瘦素水平對(duì)照組為2075.1±609.2.pg/mg，模型8周、12周、16周分別為1803.9±914.4pg/mg、2052.5±700.3pg/mg、2644.3±1129.7pg/mg，與對(duì)照組相比無顯著性差異。在肝臟組織勻漿中，TNF-α的水平對(duì)照組714.7±86.1pg/mg，模型8周、12周、16周分別為746.4±253.5 pg/mg、861.1±71

6、.8 pg/mg、1113.3±383.3 pg/mg與對(duì)照組相比，模型組水平升高，12周，16周顯著性升高，p<0.05。血清中脂聯(lián)素水平對(duì)照組13.2±6.2 ug/ml 模型8周，12周分別為25±5 ug/ml、 15.8±6.9 ug/ml與對(duì)照組相比，8周時(shí)顯著性升高p<0.05，12周無顯著差異。組織勻漿中，對(duì)照組13.2±7.3 ug/mg模型8周、12周、16周分別為16.3±8.8 ug/mg 16.3±7.9ug/

7、mg 35±13.6 ug/mg，與對(duì)照組相比16周升高有顯著性差異，p<0.05。在肝組織勻漿中，脂聯(lián)素水平與TNF-α的水平呈正相關(guān)，r=0.78 p<0.05，瘦素水平與TNF-α的水平呈正相關(guān)，r=0.77p<0.05。 結(jié)論：本試驗(yàn)成功制備大鼠非酒精性脂肪肝模型，瘦素、腫瘤壞死因子-α可能參與了非酒精性脂肪肝的發(fā)病及發(fā)展過程，脂聯(lián)素在非酒精性脂肪肝早期可能通過代償發(fā)揮保護(hù)作用。在肝組織勻漿中，脂聯(lián)素水平與TNF-α的水