抗氧化劑吡咯烷二硫代氨基甲酸（PDTC）對(duì)卵巢癌細(xì)胞HO8910增殖、凋亡的影響及機(jī)制的研究.pdf

1、目的： 研究抗氧化劑吡咯烷二硫代氨基甲酸(pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC)體外對(duì)卵巢癌HO8910細(xì)胞增殖及凋亡的影響，了解PDTC體外抗卵巢癌作用及其機(jī)制，為PDTC在卵巢癌治療提供重要的實(shí)驗(yàn)室基礎(chǔ)和理論依據(jù)。 方法： 1.采用四甲基偶氮哇藍(lán)(MTT)法，分別檢測(cè)不同濃度PDTC，DDP和聯(lián)合應(yīng)用PDTC與DDP對(duì)H08910細(xì)胞生長(zhǎng)抑制的影響。 2.采用吖啶橙和溴化乙

2、啶雙熒光染色法觀察凋亡細(xì)胞。 3.采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同濃度PDTC作用HO8910后的細(xì)胞凋亡率。 4.免疫組化法測(cè)定PDTC作用后卵巢癌HO8910細(xì)胞IKK β、NF-кB、XIAP、Bcl-2以及caspase-3表達(dá)的影響。 結(jié)果： 1.PDTC濃度為25μM、50μM、100μM和200μM時(shí)，作用12、24、36h均明顯抑制HO8910細(xì)胞的增殖，與對(duì)照組比較差異有顯著性(P<0.01)，并

3、具有時(shí)間、劑量依賴(lài)性。12、24、36h，HO8910的半數(shù)抑制率IC<,50>所需的PDTC濃度分別為393.2836、340.9378、275.7231μ mol/L。 2.順鉑聯(lián)合應(yīng)用PDTC時(shí)能顯著提高順鉑殺傷卵巢癌細(xì)胞作用。單用DDP 0.75μ g/ml、1.5 μg/ml、3.0μg/ml和6.0 μg/ml作用24h時(shí)，細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率僅為9.22％、19.9％、37.39％和66.72％，25μM PDT

4、C預(yù)處理1h后加入DDP使作用終濃度達(dá)到0.75μg/ml、1.5μg/ml、3.0μg/ml和6.0μg/ml作用24h后其細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率則為18.61％、37.23％、65.78％和88.03％，聯(lián)合應(yīng)用PDTC和DDP與單用DDP對(duì)卵巢癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率相比，差異有顯著性(P<0.05)。 3.將PDTC與細(xì)胞共同作用后，經(jīng)吖啶橙/溴化乙啶雙熒光染色觀察可見(jiàn)中晚期凋亡細(xì)胞呈橘紅色或紅色，染色質(zhì)凝集，染色均勻，細(xì)胞核變小，可

5、見(jiàn)凋亡小體。 4.采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同濃度PDTC誘導(dǎo)凋亡作用，當(dāng)PDTC濃度為25μM、50μM、100μM時(shí)，作用HO8910 24h小時(shí)后，細(xì)胞凋亡率分別為4.38％、8.13％、17.16％，與對(duì)照組比較及三組之間比較差異有顯著性(P<0.01)。 5.免疫組化法顯示PDTC濃度為10，100μM作用24h小時(shí)后細(xì)胞漿中NF-кB、IKK13表達(dá)無(wú)顯著性變化，caspase-3增加，Bcl-2、XIAP及細(xì)胞核

6、中表達(dá)NF-кB下調(diào)，與對(duì)照組比較差異有顯著性(P<0.01)。 結(jié)論： 1.PDTC能有效抑制卵巢癌HO8910細(xì)胞增殖。 2.PDTC能誘導(dǎo)卵巢癌HO8910細(xì)胞凋亡，其治療腫瘤機(jī)制可能是通過(guò)抑制NF-кB活性并下調(diào)XIAP，Bcl-2表達(dá)，促進(jìn)caspase-3活化而抑制腫瘤生長(zhǎng)和誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。 3.抗氧化劑PDTC能夠增強(qiáng)順鉑化療作用，提高療效。 4.抗氧化劑PDTC有望為卵巢癌輔助治