人的可溶性白細(xì)胞介素1受體Ⅰ型(hsIL-1RI)在鏈霉菌中的表達(dá).pdf

1、該工作是以鏈霉菌為表達(dá)系統(tǒng)，克隆并表達(dá)人的可溶性白細(xì)胞介素1受體Ⅰ型。pSGL1是該實(shí)驗(yàn)室從S。globisporus中分離到的一新質(zhì)粒。為了將該質(zhì)粒發(fā)展成有用的克隆載體，該工作首先測(cè)定了該質(zhì)粒的最小復(fù)制子核苷酸列，經(jīng)檢索是一個(gè)新的序列，并且確定了其屬于滾環(huán)復(fù)制類(lèi)型的質(zhì)粒;然后以S。globisporus總DNA為模板，采用PCR方法擴(kuò)增得到含有C1027前蛋白信號(hào)肽gpp及其調(diào)控序列的DNa片段;將其插入pSGL1的衍生質(zhì)粒pSGLN

2、，構(gòu)建了新的鏈霉菌-大腸相菌穿梭質(zhì)粒載體pSGLGpp。從hepG2細(xì)胞中提取總RNA，采用RT-RCR方法擴(kuò)增得到人的可溶性白細(xì)胞介素1受體Ⅰ型(sIL-1RI)的cDNA，經(jīng)序列測(cè)定表明結(jié)果正確。為了觀察gpp和me1C1信號(hào)肽調(diào)控序列啟動(dòng)sIL-1RI的分泌表達(dá)，將區(qū)犁重組菌株分別在酷蛋白發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵到72hr，于24hr，48hr和72hr取樣。發(fā)酵液經(jīng)SDS-PAGE和Westernblot證實(shí)分泌表達(dá)了sIL-1RI，經(jīng)