新生大鼠高氧性肺損傷肺組織中Smad3及PPAR-γ的蛋白和mRNA表達(dá)及羅格列酮的干預(yù)作用.pdf

1、目的:選擇新生大鼠建立急性高氧性的肺損傷模型并使用羅格列酮進(jìn)行干預(yù)且和正常新生大鼠進(jìn)行對(duì)比：1.觀察與比較各實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物其一般情況以及肺組織的病理改變；2.探究各實(shí)驗(yàn)組的肺組織內(nèi)Smad3及PPAR-γ表達(dá)的變化，從而探討Smad3及PPAR-γ于急性高氧性的肺損傷其發(fā)病機(jī)制中的作用；3.探討羅格列酮是否發(fā)揮對(duì)急性高氧性的肺損傷起到的保護(hù)作用，對(duì)臨床防治新生兒高氧性肺損傷來(lái)說(shuō)可以提供理論依據(jù)。
　　方法：將108只出生滿48小時(shí)的新

2、生SD大鼠（雌雄均可），按照隨機(jī)原則分為三組：I組--空氣組；II組--高氧組（高氧+生理鹽水）；III組--羅格列酮干預(yù)組（高氧+羅格列酮）；
　　I組新生大鼠置于常壓空氣中飼養(yǎng)。II組、III組新生大鼠置于氧濃度維持在90-95％的氧箱中飼養(yǎng)。III組于實(shí)驗(yàn)第一天起每日灌喂羅格列酮(3mg/kg)。I組與II組于實(shí)驗(yàn)第一天起每日灌喂等量生理鹽水。
　　每組按實(shí)驗(yàn)時(shí)間點(diǎn)分為1天、3天、7天三個(gè)亞組，每組于各實(shí)驗(yàn)時(shí)間點(diǎn)分別隨

3、機(jī)選取12只實(shí)驗(yàn)鼠，處死后取材并完成下述指標(biāo)的檢測(cè)：
　　（1）肺泡灌洗液中的總蛋白含量；
　?。?）選取左肺并稱其濕重和干重，算出肺濕/干重比；
　?。?）觀察肺組織病理學(xué)情況：選取右上肺對(duì)其進(jìn)行病理切片以觀察肺組織的病理改變；
　　（4）肺組織Smad3及PPAR-γ蛋白及mRNA的含量測(cè)定：選取肺組織勻漿并提取蛋白，采用western blotting法對(duì)其蛋白含量分別加以測(cè)定；另選取取部分肺組織進(jìn)行RNA

4、提取，采用RT-PCR法對(duì)其mRNA含量分別進(jìn)行測(cè)定。
　　結(jié)果：1.各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一般情況觀察：I組中的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物精神狀態(tài)佳，皮毛光澤正常，飲食正常，活動(dòng)靈活，無(wú)死亡。II組中的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物高氧暴露1天時(shí)精神狀態(tài)好，皮毛光澤可，進(jìn)食可，離氧后無(wú)呼吸困難表現(xiàn)。高氧暴露三天后實(shí)驗(yàn)動(dòng)物精神尚可，皮毛光澤較前變差，進(jìn)食較差，脫離氧氣后呼吸頻率加快。高氧暴露七天時(shí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物精神萎靡，皮毛光澤差，少吃少動(dòng)，離氧后出現(xiàn)呼吸急促，個(gè)別死亡。III組的實(shí)驗(yàn)

5、動(dòng)物一般情況較II組有改善。
　　2.肺組織病理學(xué)改變：I組大鼠各時(shí)相肺組織結(jié)構(gòu)規(guī)整，肺泡大小均一、肺泡腔內(nèi)無(wú)炎癥反應(yīng)。II組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物于高氧暴露1天時(shí)可見肺泡結(jié)構(gòu)完整，肺泡內(nèi)可見少許紅細(xì)胞，無(wú)明顯滲出；3天后可見肺血管擴(kuò)張充血，肺泡內(nèi)可見紅細(xì)胞、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，肺間質(zhì)水腫，肺間隔斷裂，肺泡腔擴(kuò)大；7天時(shí)則肺組織出現(xiàn)明顯液體滲出及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，肺泡內(nèi)出血，肺間質(zhì)水腫明顯加重，部分肺間隔增寬變形，結(jié)構(gòu)紊亂。III組的肺組織病理改變，肺泡

6、腔內(nèi)液體滲出，紅細(xì)胞、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)較II組明顯減輕。
　　3.肺組織濕/干重比（W/D）：實(shí)驗(yàn)1天時(shí)，各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的肺組織W/D無(wú)明顯差異（P＞0.05）。實(shí)驗(yàn)3天、7天時(shí)，II組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的肺組織W/D較Ⅰ組有升高（P＜0.01），III組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的肺組織W/D較II組有降低（P＜0.01）。
　　4.支氣管肺泡灌洗液（BLAF）中總蛋白（TP）含量測(cè)定：實(shí)驗(yàn)1天時(shí)，三組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物BLAF中TP含量無(wú)明顯差異（P＞0.05）。

7、而實(shí)驗(yàn)3天及7天時(shí)，II組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的BLAF中TP含量明顯高于Ⅰ組(P＜0.01)，而III組的BLAF中TP含量則明顯低于II組(P＜0.01)。
　　5.肺組織中Smad3及PPAR-γ蛋白表達(dá)水平的變化：western blotting檢測(cè)結(jié)果表明：各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肺組織中的Smad3、PPAR-γ的蛋白表達(dá)水平在實(shí)驗(yàn)第1天無(wú)顯著差異（P＞0.05）。實(shí)驗(yàn)第3天及第7天時(shí)，II組Smad3的蛋白表達(dá)水平較I組有明顯升高（P＜0.

8、01），II組PPAR-γ的蛋白表達(dá)水平較I組有明顯下降（P＜0.01）。III組肺組織中的PPAR-γ的蛋白表達(dá)明顯高于II組，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。
　　6.肺組織中 Smad3及 PPAR-γ的mRNA表達(dá)水平的變化：在本實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)RT-PCR方法檢測(cè)顯示：各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肺組織中的Smad3、PPAR-γ的mRNA表達(dá)水平在實(shí)驗(yàn)第1天無(wú)顯著差異（P＞0.05）。實(shí)驗(yàn)第3天及第7天時(shí)，II組Smad3的mRNA表

9、達(dá)水平較I組有明顯升高（P＜0.01），II組PPAR-γ的mRNA表達(dá)水平較I組有明顯下降（P＜0.01）。III組肺組織中的PPAR-γ的mRNA表達(dá)水平明顯高于II組，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。
　　結(jié)論：（1）暴露于高濃度氧氣中一定時(shí)間對(duì)新生大鼠肺組織有損傷作用，主要的病理表現(xiàn)為肺組織局部充血水腫、炎癥滲出、肺組織結(jié)構(gòu)紊亂、肺泡數(shù)目減少、呼吸功能受損、氧依賴性增強(qiáng)。
　?。?）急性高氧性的肺損傷新生大鼠模型