中國人家族性腺瘤性息肉病APC基因胚系突變的檢測.pdf

1、目的：家族性腺瘤性息肉病(familial adenomatous polyposis,FAP)是一種罕見的常染色體顯性遺傳性疾病,發(fā)病率大約為1/5000-1/10000,臨床主要表現(xiàn)為大腸內(nèi)多發(fā)的腺瘤性息肉(息肉總數(shù)超過100個),多數(shù)患者在青年時期發(fā)病,如不及時治療,則幾乎100％的患者發(fā)生癌變。FAP是由于定位于5q21-q22的APC基因發(fā)生胚系突變而導致的,APC基因是一個腫瘤抑制基因,含有一個8538bp的開放閱讀框架,共

2、15個外顯子,編碼一個含2843個氨基酸的蛋白。APC基因產(chǎn)物APC分子量約為310kd,是一個多區(qū)域結合蛋白,包括N-端的寡聚域和犰狳域、中間部分的大量的15和20個氨基酸的重復區(qū)域、和包括基礎域、EB1結合域、DLG哺乳動物同源物C-端。通過這些多結構域,APC結合大量的蛋白使APC不僅在腫瘤抑制方面,而且在在細胞分化,粘附,極化形成,遷移,發(fā)展,凋亡和神經(jīng)元功能方面起作用,APC在小腸和直結腸上皮高表達,起著在時間和空間上高度調(diào)節(jié)

3、增殖、遷移、分化、凋亡等腸上皮更新現(xiàn)象的穩(wěn)態(tài)的作用。大多數(shù)突變?yōu)橐拼a突變和無義突變,這些突變導致了分子質(zhì)量少于野生型蛋白的截短蛋白的出現(xiàn)。家族性腺瘤性息肉病患者中約有60-80%的病人可以檢測到APC基因的突變,約有60-70%的FAP患者存在APC基因的微小突變,突變陰性患者中10-15%則為APC基因的大片段缺失性突變。從1991年APC基因被鑒定以來,迄今已有900多個胚系突變被報道,但是關于中國人家族性腺瘤性息肉病中APC基因的

4、胚系突變研究較少,因此為了進一步研究研究中國人家族性腺瘤性息肉病(FAP)APC基因胚系突變的特點,設計了本實驗研究。
　　方法：1.患者收集2002-2008在北京軍區(qū)總醫(yī)院診斷和治療的14個FAP家系的患者,研究對象均簽署知情同意書。2.微小突變檢測抽取14個FAP家系中的先證者的外周血,從外周血淋巴細胞中提取基因組DNA,對APC基因的15個外顯子包括剪接區(qū)進行PCR擴增,用直接測序法對擴增產(chǎn)物進行微小突變的檢測,3.大片段

5、缺失的檢測對APC基因突變檢測陰性的患者運用多重連接依賴的探針擴增(MLPA)技術進行大片段缺失的檢測。
　　結果：(1)用直接測序法在14個FAP家系中發(fā)現(xiàn)9例微小突變,突變檢出率為64.3%。包括6個移碼突變(66.7%),2個剪接區(qū)的突變(22.2%),1個無義突變(11.1%),發(fā)現(xiàn)4個新的突變,分別為c.532-2A>T、c.2336-2337insT、c.3923-3929delAAGAAAA和c.4179-4180G

6、AdelinsT。(2)在直接測序法未檢測到微小突變的5例患者中用MLPA的方法檢測出2例存在大片段缺失,其中一例同時存在第11外顯子和10A(Alternative exon)的大片段缺失;另一例為exon15 start的大片段缺失(MLPA檢測中exon15包括start、middle、end三個探針),這兩種大片段缺失均未見報道。大片段缺失的檢出率在FAP中為14.3%,在APC基因突變陰性患者中為40%。(3)微小突變與大片段