硫化氫對大鼠海馬神經(jīng)元缺氧復(fù)氧損傷后的作用及其機制.pdf

1、目的:研究外源性硫化氫(hydrogen sulfide,H2S)對大鼠海馬神經(jīng)元氧糖缺失/恢復(fù)(oxygen-glucose deprivation and recovery,OGD/R)損傷后的作用,并探討海馬神經(jīng)元OGD/R損傷后缺氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-la)的變化及H2S的干預(yù)作用。
　　方法:孕16-18d胎鼠海馬神經(jīng)元原代培養(yǎng),培養(yǎng)7d后神經(jīng)元特異性烯醇化酶(

2、neuron-specific enolase,NSE)免疫組化法作神經(jīng)元鑒定,培養(yǎng)第8天時OGD1h/R24h造成缺氧/復(fù)氧損傷,缺氧同時給予硫氫化鈉(sodium hydrosulfide,NaHS)干預(yù)。將大鼠海馬神經(jīng)元隨機分為3組:正常培養(yǎng)組(Ⅰ組)、OGD/R組(Ⅱ組)、OGD/R+NaHS組(Ⅲ組),Ⅲ組又根據(jù)NaHS濃度分為Ⅲ1-5亞組;NaHS濃度分別為25、50、100、200、400μmol/L。MTT法測定各組細胞

3、活力,比色法檢測各組培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性,流式法檢測各組細胞凋亡,RT-PCR法檢測各組細胞Caspase-3mRNA,HIF-1mRNA表達。
　　結(jié)果:(1)與正常組相比較,模型組細胞活力明顯降低,培養(yǎng)液中LDH漏出增多,凋亡加重,Caspase-3mRNA、HIF-1αmRNA表達增高(P<0.01);
　　(2)與模型組相比較,Ⅲ1組細胞活力、培養(yǎng)液中LDH漏出

4、、凋亡、Caspase-3mRNA、HIF-1αmRNA表達的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05);
　　(3)與模型組相比較,Ⅲ2-4組細胞活力明顯增高,培養(yǎng)液中LDH漏出減輕,凋亡減輕,Caspase-3mRNA表達降低,HIF-1αmRNA表達明顯增高(P<0.01);
　　(4)與模型組相比較,Ⅲ5組細胞活力明顯降低,培養(yǎng)液中LDH漏出增多,凋亡加重,Caspase-3mRNA表達增高,HIF-1αmRNA表達明顯降低(