ESAT-6抗原誘發(fā)的γ -干擾素測(cè)定在結(jié)核病診斷中的應(yīng)用.pdf

1、研究背景與目的
　　 結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌(mycobacterium tuberculosis，Mtb)引起的慢性傳染性疾病，據(jù)世界衛(wèi)生組織調(diào)查世界三分之一的人感染結(jié)核病，我國(guó)結(jié)核病的疫情尤為嚴(yán)重。結(jié)核病感染雖然非常的嚴(yán)重，但在臨床的診斷上還很薄弱，存在嚴(yán)重的冰山想象。目前結(jié)核菌素試驗(yàn)(tuberculin skin test，F(xiàn)ST)仍是臨床上診斷潛在結(jié)核感染的唯一可行的手段，但是由于結(jié)核菌素純蛋白衍生物(purlfied

2、 protein derivative，PPD)是含有200多種蛋白的混合物，所以陽(yáng)性的結(jié)果也不能區(qū)分是卡介苗(bacilli calmette guerin，BCG)接種、非結(jié)核分枝桿菌(nontuberculous mycobacterium，NTM)還是結(jié)核分枝桿菌的感染，有必要建立一種新的診斷方法來(lái)取代TST。近年來(lái)，隨著免疫學(xué)和基因組學(xué)的發(fā)展，出現(xiàn)了以T細(xì)胞為基礎(chǔ)的體外γ干擾素反應(yīng)測(cè)定法。他的基本原理是，被結(jié)核分枝桿菌致敏的T

3、淋巴細(xì)胞，再次受到相關(guān)抗原刺激后會(huì)釋放γ干擾素，高水平的γ干擾素反應(yīng)可以提示結(jié)核分枝桿菌的感染。誘導(dǎo)刺激所用的抗原如果選擇那些結(jié)核分枝桿菌特有而卡介苗和大多數(shù)非結(jié)核分枝桿菌沒(méi)有的抗原，比如，早期分泌抗原靶6000(early secreting antigenic target-6，ESAT-6)，即可成功地避開(kāi)上述干擾，使在結(jié)核病的診斷中特異性大大提高。
　　 方法：
　　 分四組研究對(duì)象：普通結(jié)核病人組；兒童、青少年

4、和老年患者組；隨療程進(jìn)行ESAT-6的動(dòng)態(tài)檢測(cè)組；艾滋病(human immunodeficiency virus，HIV)陽(yáng)性合并結(jié)核感染組。用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(wnzyme linked immunosorbentassay，ELISA)法檢測(cè)γ干擾素的含量進(jìn)行數(shù)據(jù)的對(duì)比分析并建立測(cè)定結(jié)果的判斷標(biāo)準(zhǔn)。
　　 結(jié)果：
　　 (1)結(jié)核密切接觸者與痰培養(yǎng)證實(shí)的結(jié)核患者與健康對(duì)照組相比，ESAT-6反應(yīng)具有很高的敏感性。結(jié)

5、核菌素皮試(TST試驗(yàn))作為結(jié)核病篩查的重要手段，但是在卡介苗(BCG)接種廣泛覆蓋以及非結(jié)核分枝桿菌感染率高的地區(qū)，其特異性受到了嚴(yán)重的干擾。故選取結(jié)核分枝桿菌中存在而B(niǎo)CG及大多數(shù)非結(jié)核分枝桿菌不存在的RD1區(qū)編碼的蛋白ESAT-6進(jìn)行體外γ-干擾素誘發(fā)來(lái)進(jìn)行結(jié)核病的診斷。
　　 (2)測(cè)定體外全血ESAT-6，在結(jié)核病診斷中有較好的敏感性和特異性，尤其是在兒童和青少年結(jié)核病診斷中具有更為突出的優(yōu)勢(shì)。
　　 (3)E

6、SAT-6是結(jié)核感染和結(jié)核發(fā)病早期分泌抗原，65％的病人ESAT-6反應(yīng)隨療程進(jìn)展逐漸下降至正常，可以解釋其在老年結(jié)核患者中敏感性低的原因。
　　 (4)ESAT-6體外誘發(fā)的γ-干擾素反應(yīng)在HIV陽(yáng)性合并結(jié)核病的診斷中同樣具有很高的價(jià)值。ESAT-6反應(yīng)是否陽(yáng)性與CD4大于或小于200/mm3無(wú)顯著性差異，選取這種以增加的比率來(lái)作為判斷標(biāo)準(zhǔn)具有的優(yōu)越性。
　　 (5)ESAT-6 IFN-γ反應(yīng)測(cè)定其檢出率是PPD皮試