自體血管內(nèi)皮祖細(xì)胞抗衰老作用的初步臨床研究.pdf

1、[背景]
　　 老齡化問題被認(rèn)為是21世紀(jì)三大世界性社會問題之一。WHO對老齡化的定義是如果一個國家的60歲以上老年人口占人口總數(shù)的10％，或65歲以上老年人口占總?cè)丝跀?shù)的7％，即這個國家已經(jīng)步入老齡化階段。發(fā)達(dá)國家是最早步入老齡化階段的國家，自20世紀(jì)70年代以來，世界各國人口年齡結(jié)構(gòu)的老齡化過程存在著差異。截至2006年底，我國已經(jīng)是老齡化人口唯一超過1億的國家，到2050年我國衰老人口將占總?cè)丝诘乃姆种弧?br>　　

2、目前研究認(rèn)為衰老和老年病的發(fā)生是相關(guān)聯(lián)的，二者具有相同的病理生理過程，如免疫系統(tǒng)損傷、神經(jīng)內(nèi)分泌紊亂、脂類及糖類代謝紊亂等。衰老后一些老年病如動脈粥樣硬化、冠心病、糖尿病、高血壓病、神經(jīng)變性疾病等的發(fā)生率明顯增加。因此衰老將導(dǎo)致老年病的發(fā)生率增加、患病率提高。這些老年病將嚴(yán)重影響老年人群的健康，需要占用更多的醫(yī)療資源，給我國經(jīng)濟(jì)及生產(chǎn)力帶來極大的沖擊。因此延緩衰老對我國目前的發(fā)展具有重要意義。
　　 有關(guān)衰老機(jī)制的研究很多，目前

3、已經(jīng)深入到分子水平。如p16-INK4a被認(rèn)為是一種細(xì)胞衰老的重要生物學(xué)標(biāo)記，清除p16-INK4a陽性的細(xì)胞可以延緩衰老。細(xì)胞衰老涉及到多種復(fù)雜的生物分子機(jī)制，如能實現(xiàn)再生細(xì)胞代替衰老細(xì)胞，使細(xì)胞的再生和衰老實現(xiàn)均衡，延緩衰老有可能成為現(xiàn)實。1493-1541年，菲律賓Auredus Paracelsus首次提出細(xì)胞療法，通過輸入活細(xì)胞使機(jī)體獲得年輕化，自20世紀(jì)50年代，全世界已經(jīng)有數(shù)百萬人接受細(xì)胞療法。細(xì)胞療法其中之一即是干細(xì)胞療

4、法。衰老進(jìn)程中干細(xì)胞不斷丟失，因此急時補充干細(xì)胞有可能延緩衰老。目前脂肪干細(xì)胞抗衰老已經(jīng)初步應(yīng)用于臨床并取得確切療效，骨髓間充干細(xì)胞等在動物實驗組已被證實有抗衰老作用，目前血管內(nèi)皮祖細(xì)胞(Endothelialprogenitor cells，EPCs)已經(jīng)在急性心肌梗塞、難治性心絞痛、肢體缺血、慢性肝病等缺血性疾病的臨床實驗得到應(yīng)用。Taguichi的臨床試驗證實血管內(nèi)皮祖細(xì)胞不僅可以促進(jìn)腦缺血部位的血管新生，維持血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能，

5、還可以促進(jìn)神經(jīng)元的生長。以上組織和功能的恢復(fù)與血管內(nèi)皮祖細(xì)胞分泌的內(nèi)皮生長因子、胰島素生長因子及纖維母細(xì)胞生長因子等有關(guān)。據(jù)研究報道胰島素生長因子具有抗衰老的作用，而血管內(nèi)皮祖細(xì)胞是否具有抗衰老作用，目前臨床研究中尚未見到報道。
　　 目前應(yīng)用于抗衰老評定的主要有抗氧化類物質(zhì)、激素類、免疫功能及量表。自由基衰老理論認(rèn)為細(xì)胞代謝產(chǎn)生的自由基，在人體衰老中起很重要的作用。超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SO

6、D)是體內(nèi)自由基防御體系中最重要的酶類抗氧化劑，它可直接清除超氧陰離子自由基，阻斷自由基連鎖反應(yīng)，保護(hù)組織免受超氧陰離子自由基的損傷，SOD活力的高低間接反應(yīng)機(jī)體抗氧化的能力，即反應(yīng)機(jī)體抗衰老能力;人體生長、發(fā)育與衰老主要受激素分泌水平的調(diào)節(jié)，激素分泌水平在不同的生理階段發(fā)生不同的變化，IFG-1具有抗衰老作用，能反應(yīng)機(jī)體衰老程度;衰老的免疫學(xué)假說認(rèn)為免疫系統(tǒng)參加了脊椎動物的衰老過程，是衰老過程的主要調(diào)節(jié)系統(tǒng)之一，可以通過免疫球蛋白(I

7、gA、IgG、IgM)測定免疫系統(tǒng)機(jī)能，隨著衰老，血液中IgA、IgG升高，IgM降低;量表如衰老自測量表及匹茲堡睡眠量表評定可以測定機(jī)體機(jī)能狀態(tài);生理耗能指數(shù)(physiological index of energy consumption，PCI)亦能評定機(jī)體機(jī)能狀態(tài)，PCI=（步行3min后心律-安靜狀態(tài)下的心律）(bts/min)/步行速度(m/min)。
　　 [目的]
　　 采用血液指表及量表評定觀察輸入自

8、體血管內(nèi)皮祖細(xì)胞的安全性及其在抗衰老方面的作用。
　　 [方法]
　　 2011-10至2012-10月在我院康復(fù)科選取4名受試者。入選患者:25歲＜年齡＜80歲;自愿配合治療及隨訪;排除標(biāo)準(zhǔn):孕婦、哺乳期患者及腫瘤病患，自身免疫性疾病，對青霉素等過敏，發(fā)熱性疾病，肝腎呼吸系統(tǒng)疾病者。實驗組2例（男1例45歲，女1例75歲），對照組2例（男1例49歲，女1例77歲）。實驗組和對照組均行常規(guī)治療（傳統(tǒng)中醫(yī)治療及運動療法），

9、此外實驗組進(jìn)行自體EPCs移植。
　　 治療方法:
　　 1.實驗前實驗組和對照組均進(jìn)行血常規(guī)、血凝指標(biāo)、尿常規(guī)、便常規(guī)、肝腎功、糖代謝指標(biāo)、脂代謝指標(biāo)、心衰指標(biāo)、炎癥指標(biāo)、傳染病八項定量相關(guān)檢查，排除不能納入臨床研究的對象。
　　 2.血管內(nèi)皮祖細(xì)胞獲取實驗組行骨髓穿刺:均選用髂前上棘抽取骨髓50ml左右，行干細(xì)胞培養(yǎng)。自體肱靜脈外周血30ml，離心獲得血清后冰凍保存以備混懸干細(xì)胞用。對照組無需行此操作。

10、>　　 3.細(xì)胞培養(yǎng)及鑒定細(xì)胞培養(yǎng)嚴(yán)格在特定條件下進(jìn)行，密度梯度離心法獲取骨髓單個核細(xì)胞。將骨髓單個核細(xì)胞以1×105/cm2接種于纖連蛋白包被的塑料培養(yǎng)瓶。特定培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)4天后去除非粘附細(xì)胞。每周換液2次，細(xì)胞80％融合時進(jìn)行傳代。一般血液培養(yǎng)需一月左右可達(dá)到移植需求量(5×106/kg)，細(xì)胞培養(yǎng)后濃度及分離均由公司達(dá)到統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。專業(yè)公司進(jìn)行端粒酶表達(dá)情況、表面標(biāo)志、成品檢定、存活率、內(nèi)毒素、無菌檢查、支原體、病毒外源因

11、子、逆轉(zhuǎn)錄病毒、特殊人源病毒、細(xì)胞致瘤性、殘余血清檢測等。
　　 4.細(xì)胞移植細(xì)胞擴(kuò)增到足夠的數(shù)量后(5×106/kg)，進(jìn)行移植。第一次移植，將2.5×106/kg個細(xì)胞，混懸于含5％自體血清的生理鹽水100ml中，經(jīng)橈靜脈輸入體內(nèi)。輸入過程中密切觀察患者反應(yīng)，如有不良反應(yīng)時，急時停止輸液。約1周后行第二次移植，移植的細(xì)胞數(shù)量同第一次。
　　 5.實驗前及試驗后第4個月采集受試者血液指標(biāo)SOD、IFG-1、免疫球蛋白三

12、項IgA、IgG、IgM，量表評定受試者衰老程度及睡眠質(zhì)量，測定機(jī)體生理耗能指數(shù)。
　　 [療效評定標(biāo)準(zhǔn)]
　　 1.超氧化物歧化酶(SOD)
　　 2.胰島素樣生長因子-1(IGF-1)
　　 3.免疫球蛋白三項IgA、IgG、IgM
　　 4.衰老自測量表（AAS）量表評定
　　 5.匹茲堡睡眠指數(shù)(PSQI)
　　 6.生理耗能指數(shù)(PCI)
　　 [統(tǒng)計學(xué)方法]

13、r>　　 暫無:本實驗?zāi)壳凹{入受試對象共4例。預(yù)期采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件對實驗結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。
　　 [結(jié)果]
　　 1.超氧化物歧化酶(SOD)
　　 實驗組兩名受試者治療后血液中超氧化物歧化酶歧化酶濃度較治療前升高，對照組受試者治療后較治療前血液中SOD，Ⅲ降低，Ⅳ升高。
　　 2.胰島素樣生長因子-1(IGF-1)
　　 實驗組兩名受試者治療后血液中胰島素樣生長因子-1(IGF-

14、1)較治療前升高，對照組兩名受試者治療后血液中胰島素樣生長因子-1(IGF-1)較治療前變化不明顯。
　　 3.免疫球蛋白IgA、IgG、IgM
　　 實驗組兩名受試者治療后較治療前血液中IgA、IgG降低，IgM升高，對照組兩名受試者血液治療后較治療前血液中IgA、IgG下降，IgM無明顯變化。
　　 4.衰老自測量表(AAS)量表評定
　　 實驗組兩名受試者治療后較治療前量表評定結(jié)果有明顯降低;對照組

15、兩名患者治療后較治療前量表評定有降低，變化量較實驗組小。
　　 5.匹茲堡睡眠量表(PSQI)量表
　　 實驗組兩名受試者治療后較治療前量表評定結(jié)果降低;對照組兩名患者治療后較治療前量表評定降低。
　　 6.生理耗能指數(shù)(PCI)
　　 實驗組兩名受試者治療后較治療前量表評定結(jié)果有明顯降低;對照組兩名患者治療后較治療前量表評定有降低，變化量較實驗組小。
　　 [結(jié)論]
　　 通過臨床觀察，