雌激素對(duì)大鼠急性高眼壓模型中小膠質(zhì)細(xì)胞的影響.pdf

1、目的:青光眼是臨床最常見(jiàn)致盲眼病之一,發(fā)病機(jī)制尚不清楚,其中青光眼免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制逐漸引起人們的關(guān)注。視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細(xì)胞作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)最具代表性的免疫細(xì)胞已成為研究熱點(diǎn),其視神經(jīng)保護(hù)與毒性的雙重作用歸因于它對(duì)一系列病變做出反應(yīng)后所能合成和分泌的物質(zhì)不同,因此針對(duì)視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細(xì)胞雙重作用的藥物研究成為治療青光眼的切入點(diǎn)。有研究表明雌激素具有免疫細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)作用,亦有視神經(jīng)保護(hù)作用,故本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立大鼠急性高眼壓模型,觀察雌激素對(duì)視網(wǎng)膜小膠

2、質(zhì)細(xì)胞的活化、誘導(dǎo)型一氧化碳合酶(iNOS)的表達(dá)影響及對(duì)視神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的保護(hù),為今后治療青光眼提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法:SD大鼠35只雄性(全部采用雄性大鼠的目的是盡量減少內(nèi)源性雌激素對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響),無(wú)眼疾,體重200±20 g,分3組,Ⅰ組即正常組5只(10眼),余30只均采用前房加壓灌注法將左眼制成急性高眼壓模型(以下統(tǒng)稱模型眼),右眼為自身對(duì)照眼(以下統(tǒng)稱為自身對(duì)照眼),再將這30只分為Ⅱ組即雌激素腹腔注射組15只和Ⅲ組

3、即消毒橄欖油注射組15只。最終棄去實(shí)驗(yàn)中突然卒死及不符合標(biāo)準(zhǔn)的眼球,每組各保留10只眼球固定后行石蠟切片,應(yīng)用免疫組化技術(shù)分析視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細(xì)胞的表達(dá)(細(xì)胞表面標(biāo)記物為CD11b)及其iNOS的表達(dá),以及視神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的凋亡。計(jì)算機(jī)圖像分析軟件對(duì)圖像中的陽(yáng)性反應(yīng)部位進(jìn)行光密度分析,三者半定量測(cè)定結(jié)果均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD)表示,應(yīng)用SPSS統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　 結(jié)果:1.組織病理學(xué)變化:
　　 1.1C

4、D11b陽(yáng)性小膠質(zhì)細(xì)胞:Ⅰ組可見(jiàn)小膠質(zhì)細(xì)胞淡染,呈棕黃色、分枝狀,胞體小,具有伸向各個(gè)方向的細(xì)小突起。Ⅱ、Ⅲ組模型眼活化的小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量增加,突起變短、變粗,胞體增大、變圓,并聚集于凋亡的節(jié)細(xì)胞及細(xì)胞碎片周圍。
　　 1.2視神經(jīng)節(jié)細(xì)胞:Ⅰ組視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞呈單層排列,無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞。Ⅱ、Ⅲ組的自身對(duì)照眼與Ⅰ組相同。Ⅱ、Ⅲ組的模型眼光鏡下可見(jiàn)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)目明顯減少,視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層呈空泡樣改變,部分細(xì)胞出現(xiàn)核溶解、核染色淺淡

5、、胞漿染色淺淡。Ⅱ組模型眼視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)目減少,形態(tài)大致正常,神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層結(jié)構(gòu)基本正常。
　　 2.小膠質(zhì)細(xì)胞免疫組織化學(xué)分析(即小膠質(zhì)細(xì)胞的活化及iNOS的表達(dá)):3組CD11b陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均可檢測(cè)到,Ⅰ組未見(jiàn)到iNOS陽(yáng)性細(xì)胞,Ⅱ、Ⅲ組模型眼CD11b陽(yáng)性細(xì)胞及iNOS陽(yáng)性細(xì)胞增多,均高于Ⅰ組及自身對(duì)照眼(P＜0.05)。Ⅱ組模型眼染色CD11b陽(yáng)性細(xì)胞及iNOS陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)少于Ⅲ組模型眼陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)(P＜0.05)。

6、　　 3.視神經(jīng)節(jié)細(xì)胞TUNEL原位凋亡監(jiān)測(cè):染色陽(yáng)性的視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞(RGCs)在3組動(dòng)物眼球上均可檢測(cè)到,Ⅰ組及Ⅱ、Ⅲ組的自身對(duì)照眼TUNEL,染色陽(yáng)性的RGCs數(shù)最少。Ⅱ、Ⅲ組模型眼上TUNEL染色陽(yáng)性的RGCs稍多,陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)均高于Ⅰ組及自身對(duì)照眼(P＜0.05)。Ⅱ組模型眼TUNEL染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)少于Ⅲ組模型眼陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)(P＜0.05)。同時(shí)證實(shí)小膠質(zhì)細(xì)胞的活化及其iNOS的表達(dá)均與節(jié)細(xì)胞凋亡指數(shù)呈正相關(guān)。
　　 結(jié)論

7、:
　　 1.通過(guò)分析Ⅱ、Ⅲ組模型眼與Ⅰ組及自身對(duì)照眼CD11b及iNOS的表達(dá)(P＜0.05),證實(shí)高眼壓下小膠質(zhì)細(xì)胞活化,并表達(dá)iNOS。
　　 2.Ⅱ、Ⅲ組模型眼的CD11b及iNOS表達(dá)籌異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),表明雌激素能夠抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的活化,減少iNOS的表達(dá),從而減少合成NO神經(jīng)毒性物質(zhì)。
　　 3.NO具有神經(jīng)毒性,。
　　 4.RGCs的TUNEL檢測(cè)表明雌激素能夠減少節(jié)細(xì)胞的