腦梗死后康復(fù)治療最佳時間窗及其機(jī)理的研究.pdf

1、第一部分不同時間窗電針治療大鼠腦梗死的實(shí)驗(yàn)研究
　　 目的：探尋電針治療大鼠腦梗死的最佳時間窗及其作用機(jī)制。
　　 方法：SD 大鼠隨機(jī)分為正常組、假手術(shù)組、模型組及電針治療組，每組又根據(jù)術(shù)后治療干預(yù)時間點(diǎn)細(xì)分為術(shù)后6 h、12 h、24 h、48 h 及72 h 共5個亞組。采用線栓法將模型組及電針治療組大鼠制成左側(cè)大腦中動脈缺血再灌注(MCAO/R)模型，缺血90min后再灌注。電針治療組各亞組分別于腦缺血再灌注后6

2、 h、12 h、24 h、48 h 及72 h實(shí)施電針治療，而正常組、假手術(shù)組及模型組各亞組均于上述相應(yīng)時間點(diǎn)給予假電針治療，療程為14d。采用神經(jīng)功能缺損評分(NSS)對各亞組大鼠進(jìn)行評分，Morris 水迷宮檢測其學(xué)習(xí)記憶能力的變化，功能性核磁共振技術(shù)監(jiān)測其梗死灶體積及局部代謝的變化，TUNEL 法檢測梗死區(qū)域凋亡細(xì)胞數(shù)，免疫組化法觀察梗死區(qū)域Caspase-3 及Nestin的表達(dá)，實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)檢測梗死區(qū)域Bcl-2 m

3、RNA 及BDNF mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果：同一時間窗不同組比較：治療組MCAO/R 大鼠的NSS 評分、梗死灶體積、凋亡陽性細(xì)胞數(shù)、Caspase-3表達(dá)及逃避潛伏期均明顯低于模型組，而NAA/Cr、Bcl-2 mRNA、BDNF mRNA 及Nestin 陽性細(xì)胞數(shù)在治療組的表達(dá)均明顯高于模型組。同一組不同時間窗比較：NSS 評分24h 內(nèi)亞組和24h后亞組之間有明顯差異，上述各數(shù)據(jù)不同治療時間窗亞組之間(其中除Naa

4、/Cr 比值48h和72h 亞組之間，Caspase-3表達(dá)12h和24h 亞組之間，nestin 陽性細(xì)胞數(shù)12h與24h 亞組之間無差異外)均有明顯差異，其中逃避潛伏期、梗死體積及凋亡細(xì)胞數(shù)以術(shù)后12h亞組均值相對較低，Caspase-3表達(dá)以術(shù)后24h 亞組均值相對較低，而Naa/Cr 值、nestin陽性細(xì)胞數(shù)、BDNFmRNA 及Bcl-2mRNA表達(dá)水平以術(shù)后12h 亞組均值相對較高。
　　 結(jié)論：電針治療能夠促進(jìn)腦

5、梗死大鼠的神經(jīng)功能恢復(fù)，存在治療時間窗效應(yīng)，其最佳的治療時間窗為：12h-24h。電針可能通過縮小梗死灶體積，改善局部腦代謝，抑制神經(jīng)元凋亡及激活內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞等來發(fā)揮其促進(jìn)腦梗死后神經(jīng)功能恢復(fù)的作用。
　　 第二部分不同時間窗經(jīng)顱磁刺激治療大鼠腦梗死的實(shí)驗(yàn)研究
　　 目的：探尋經(jīng)顱磁刺激治療大鼠腦梗死的最佳時間窗及其作用機(jī)制。
　　 方法：SD 大鼠隨機(jī)分為正常組、假手術(shù)組、模型組及經(jīng)顱磁刺激治療組，每組又根

6、據(jù)術(shù)后治療干預(yù)時間點(diǎn)細(xì)分為術(shù)后6 h、12 h、24 h、48 h 及72 h 共5個亞組。采用線栓法將模型組及電針治療組大鼠制成左側(cè)大腦中動脈缺血再灌注(MCAO/R)模型，缺血90min后再灌注。經(jīng)顱磁刺激治療組各亞組分別于腦缺血再灌注后6 h、12 h、24 h、48 h 及72 h 實(shí)施磁刺激治療，而正常組、假手術(shù)組及模型組各亞組均于上述相應(yīng)時間點(diǎn)給予假磁刺激治療，療程為14d。采用神經(jīng)功能缺損評分(NSS)對各亞組大鼠進(jìn)行評分

7、，Morris 水迷宮檢測其學(xué)習(xí)記憶能力的變化，功能性核磁共振技術(shù)監(jiān)測其梗死灶體積及局部代謝的變化，TUNEL 法檢測梗死區(qū)域凋亡細(xì)胞數(shù)，免疫組化法觀察梗死區(qū)域Caspase-3 及Nestin 蛋白的表達(dá)，實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)檢測梗死區(qū)域Bcl-2mRNA 及BDNFmRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果：同一時間窗不同組比較：治療組MCAO/R 大鼠的NSS 評分、梗死灶體積、凋亡陽性細(xì)胞數(shù)、Caspase-3表達(dá)及逃避潛伏期均明顯

8、低于模型組，而NAA/Cr、Bcl-2 mRNA、BDNF mRNA 及Nestin 陽性細(xì)胞數(shù)在治療組的表達(dá)均明顯高于模型組。同一組不同時間窗比較：上述各數(shù)據(jù)不同治療時間窗亞組之間(其中除NSS評分6h與72h 亞組之間，12h、24h與48h 亞組之間，梗死體積、Naa/Cr 比值及Caspase-3表達(dá)均12h與24h 亞組之間無差異外)均有明顯差異，其中NSS 評分、逃避潛伏期、梗死體積、凋亡細(xì)胞數(shù)及Caspase-3表達(dá)以術(shù)后

9、24h 亞組均值相對較低，而Naa/Cr值及BDNFmRNA表達(dá)水平以術(shù)后24h 亞組均值相對較高，nestin 陽性細(xì)胞數(shù)及Bcl-2mRNA表達(dá)水平以術(shù)后12h 亞組均值相對較高。
　　 結(jié)論：經(jīng)顱磁刺激治療可以促進(jìn)MCAO/R 大鼠的神經(jīng)功能恢復(fù)，且不同治療時間窗促進(jìn)其恢復(fù)的程度不同，存在一個最佳治療時間窗：12h-24h。其機(jī)制可能是通過激活梗死灶周圍內(nèi)源性神經(jīng)細(xì)胞，建立新的突觸，改善局部腦代謝，抑制神經(jīng)元凋亡從而縮小梗

10、死灶體積等來發(fā)揮其促進(jìn)腦梗死后神經(jīng)功能恢復(fù)的作用。
　　 第三部分不同時間窗電針結(jié)合經(jīng)顱磁刺激治療大鼠腦梗死的實(shí)驗(yàn)研究
　　 目的：探尋電針結(jié)合經(jīng)顱磁刺激治療大鼠腦梗死的最佳時間窗及其作用機(jī)制。
　　 方法：SD 大鼠隨機(jī)分為正常組、假手術(shù)組、模型組及電針結(jié)合經(jīng)顱磁刺激治療組，每組又根據(jù)術(shù)后治療干預(yù)時間點(diǎn)細(xì)分為術(shù)后6 h、12 h、24 h、48 h 及72 h 共5個亞組。采用線栓法將模型組及電針治療組大鼠制成

11、左側(cè)大腦中動脈缺血再灌注(MCAO/R)模型，缺血90min后再灌注。治療組各亞組分別于腦缺血再灌注后6 h、12 h、24 h、48h 及72 h 實(shí)施電針和磁刺激治療，而正常組、假手術(shù)組及模型組各亞組均于上述相應(yīng)時間點(diǎn)給予假電針及磁刺激治療，療程為14d。采用功能缺損評分(NSS)對各亞組大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能評分，Morris 水迷宮檢測其學(xué)習(xí)記憶能力的變化，功能性核磁共振技術(shù)監(jiān)測其梗死灶體積及局部代謝的變化，TUNEL 法檢測梗死區(qū)域

12、凋亡細(xì)胞數(shù)，免疫組化法觀察梗死區(qū)域Caspase-3 及Nestin的表達(dá)變化，實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)檢測梗死區(qū)域Bcl-2 mRNA 及BDNF mRNA的表達(dá)變化。
　　 結(jié)果：同一時間窗不同組比較：治療組MCAO/R 大鼠的NSS 評分、梗死灶體積、凋亡陽性細(xì)胞數(shù)、Caspase-3表達(dá)及逃避潛伏期均明顯低于模型組，而NAA/Cr、Bcl-2 mRNA、BDNF mRNA 及Nestin 陽性細(xì)胞數(shù)在治療組的表達(dá)均明顯高于

13、模型組。同一組不同時間窗比較：上述各數(shù)據(jù)不同治療時間窗亞組之間(其中除NSS評分6h、12h與72h 亞組，24h與48h 亞組之間，梗死體積及Naa/Cr 比值24h與48h亞組之間無差異外)均有明顯差異，其中NSS 評分、逃避潛伏期、梗死體積、凋亡細(xì)胞數(shù)及Caspase-3表達(dá)以術(shù)后24h 亞組均值相對較低，而nestin 陽性細(xì)胞數(shù)、Naa/Cr 值及Bcl-2mRNA表達(dá)水平以術(shù)后24h 亞組均值相對較高，BDNFmRNA表達(dá)水

14、平以術(shù)后48h 亞組均值相對較高。
　　 結(jié)論：電針結(jié)合經(jīng)顱磁刺激治療可以促進(jìn)MCAO/R 大鼠的神經(jīng)功能恢復(fù)，且不同治療時間窗促進(jìn)其恢復(fù)的程度不同，過早或者過晚其療效均欠佳。存在一個最佳治療時間窗：24h-48h。其機(jī)制可能與激活動物內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞并促進(jìn)新的突觸形成從而重塑神經(jīng)功能，減少缺血引起的神經(jīng)元凋亡，縮小腦梗死體積等有關(guān)。
　　 第四部分不同時間窗被動運(yùn)動治療大鼠腦梗死的實(shí)驗(yàn)研究
　　 目的：探尋被動

15、運(yùn)動治療大鼠腦梗死的最佳時間窗及其作用機(jī)制。
　　 方法：SD 大鼠隨機(jī)分為正常組、假手術(shù)組、模型組及被動運(yùn)動治療組，每組又根據(jù)術(shù)后治療干預(yù)時間點(diǎn)細(xì)分為術(shù)后6 h、12 h、24 h、48 h 及72 h 共5個亞組。采用線栓法將模型組及被動運(yùn)動治療組大鼠制成左側(cè)大腦中動脈缺血再灌注(MCAO/R)模型，缺血90min后再灌注。治療組各亞組分別于腦缺血再灌注后6 h、12 h、24 h、48 h 及72 h 實(shí)施被動運(yùn)動治療，而

16、正常組、假手術(shù)組及模型組各亞組均于上述相應(yīng)時間點(diǎn)給予假被動運(yùn)動治療，療程為14d。對各亞組大鼠進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評分(NSS)，采用Morris 水迷宮檢測其學(xué)習(xí)記憶能力的變化，功能性核磁共振技術(shù)監(jiān)測其梗死灶體積及局部代謝的變化，TUNEL 法檢測梗死區(qū)域凋亡細(xì)胞數(shù)，免疫組化法觀察梗死區(qū)域Caspase-3 及Nestin的表達(dá)的變化，實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)檢測梗死區(qū)域Bcl-2mRNA及BDNF mRNA表達(dá)的變化。
　　 結(jié)果

17、：同一時間窗不同組比較：治療組MCAO/R 大鼠的NSS 評分、梗死灶體積、凋亡陽性細(xì)胞數(shù)、Caspase-3表達(dá)及逃避潛伏期均明顯低于模型組，而NAA/Cr、Bcl-2 mRNA、BDNF mRNA 及Nestin 陽性細(xì)胞數(shù)在治療組的表達(dá)均明顯高于模型組。同一組不同時間窗比較：上述各數(shù)據(jù)不同治療時間窗亞組之間(其中除NSS評分6h、12h與72h 亞組，24h與48h 亞組之間，梗死體積及Naa/Cr 比值24h與48h亞組之間，凋

18、亡陽性細(xì)胞數(shù)6h與72h 亞組之間無差異外)均有明顯差異，其中NSS 評分、逃避潛伏期、梗死體積、凋亡細(xì)胞數(shù)及Caspase-3表達(dá)以術(shù)后24h 亞組均值相對較低，而nestin 陽性細(xì)胞數(shù)、Naa/Cr 值、Bcl-2mRNA 及BDNFmRNA表達(dá)以術(shù)后24h 亞組均值相對較高。
　　 結(jié)論：被動運(yùn)動治療可以促進(jìn)MCAO/R 大鼠的神經(jīng)功能恢復(fù)，且不同治療時間窗促進(jìn)其恢復(fù)的程度不同，過早開始被動運(yùn)動治療療效欠佳，存在一個最佳