Midazolam對肝癌Hep G2細胞增殖和凋亡的影響及其機制探討.pdf

1、目的：PBR配體能抑制腫瘤細胞的增殖并能促進腫瘤細胞的凋亡。Midazolam屬于PBR的部分激動劑，但其對肝癌Hep G2細胞的影響目前未見報導。本實驗研究苯二氮卓類藥物Midazolam對人肝癌Hep G2細胞增殖和凋亡的影響及其作用的機制。
　　 方法：人肝癌Hep G2細胞于含10％胎牛血清、100μg/mL青霉素和100μg/mL鏈霉素的DMEM培養(yǎng)液中，置于37℃、CO2分壓為5％、濕度85％的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，取對

2、數(shù)生長期細胞進行實驗。MTS法檢測各不同濃度的Midazolam、PK11195、Midazolam+PK11195處理后的人肝癌Hep G2細胞在24h、48h、72h的增殖率。采用Annexin-V/PI雙染的方法，經(jīng)流式細胞儀檢測不同濃度的Midazolam處理24h后對人肝癌Hep G2細胞凋亡的影響。采用Hoechst33342熒光染料，應用熒光顯微鏡觀察不同濃度的Midazolam處理24h后對人肝癌Hep G2凋亡的影響及

3、細胞形態(tài)學上的改變。采用流式細胞儀檢測不同濃度的Midazolam處理的人肝癌Hep G2細胞12h后，Bax，Bcl-2，Caspase-3蛋白表達的變化。
　　 結果：1)M組：不同濃度的Midazolam對人肝癌Hep G2細胞的增殖有抑制作用，該作用呈濃度相關性和時間相關性；P組：不同濃度的PK11195對人肝癌Hep G2細胞的增殖有抑制作用，該作用呈濃度相關性和時間相關性，該組各濃度對人肝癌Hep G2細胞的增殖有抑

4、制作用，且比M組強；P+M組：不同濃度的Midazolam+PK11195對人肝癌Hep G2細胞的增殖均呈現(xiàn)抑制作用，但沒有拮抗作用，相反，兩者合用增強了單獨應用Midazolam的效果；2)不同濃度的Midazolam對人肝癌Hep G2細胞的凋亡有促進作用，該作用呈濃度相關性。與對照組相比，最高濃度組10-3M的Midazolam作用24小時促使人肝癌Hep G2的凋亡率達到(91.2±3.4)％，(P＜0.05)，最低濃度組10

5、-7M的Midazolam促使人肝癌Hep G2的凋亡率也達到(5.8±0.9)％，(P＞0.05)。各濃度組的促凋亡呈現(xiàn)出以早期凋亡為主；3)與對照組相比，各濃度的Midazolam處理組均引起了人肝癌Hep G2形態(tài)學上的改變，其中以10-3M改變最為明顯，表現(xiàn)為細胞密度大幅度的下降，細胞核固縮，核碎裂，熒光強度增強，呈高亮藍色，其它各濃度組也有不同程度的改變；4)與對照組相比，不同濃度的Midazolam作用12h后，可促進Hep

6、 G2細胞Caspase-3蛋白的表達，同時降低Bcl-2蛋白的表達，Bax蛋白表達增多，使Bcl-2/Bax蛋白比例下調(diào)，但各處理組間并無明顯呈現(xiàn)濃度相關性。
　　 結論：Midazolam可抑制人肝癌Hep G2細胞的增殖，該作用呈濃度和時間相關性，且該作用不能被PK11195逆轉；Midazolam可促進人肝癌Hep G2細胞的凋亡，該作用呈濃度相關性；Midazolam可引起人肝癌Hep G2細胞形態(tài)學上的改變，表現(xiàn)為核