突觸素和PSD-95在正常發(fā)育和單眼剝奪大鼠視皮層表達的研究.pdf

1、研究目的： 研究突觸素和PSD-95在正常發(fā)育以及單眼視覺剝奪性大鼠視皮層(visualcodex，VC)中的蛋白動態(tài)表達情況，以期在突觸水平為視覺發(fā)育可塑性提供分子基礎(chǔ)。 研究方法： 健康生后14天(P14)Wistar大鼠35只，隨機分成7組，每組5只，1-4組為正常組(normal group，N)，5-7組為單眼剝奪組(monocular depriVation group，MD)，剝奪組在生后14天行單

2、眼縫合術(shù)制備單眼剝奪模型。各組動物在同等環(huán)境下喂養(yǎng)，分別于生后14、21、28、45天麻醉、灌注、固定、開顱、冠狀切取后部腦組織(剝奪組取剝奪眼對側(cè)腦組織)，置于上述固定液中24-48h后，按常規(guī)石蠟包埋程序包埋，行5μm冠狀連續(xù)切片后，進行常規(guī)HE和免疫組織化學(xué)方法染色。顯微鏡下觀察突觸素以及PSD-95在視皮層的表達情況，Olympus顯微攝像系統(tǒng)采集圖片，圖像分析軟件進行累積光密度(IOD)值測定。對IOD值進行分析和比較，實驗數(shù)

3、據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，用SSPS11.5軟件包處理。剝奪組與正常組間采用成組設(shè)計的t檢驗，同組發(fā)育不同時限的光密度值采用方差分析，同組兩種蛋白表達的相關(guān)性，采用Pearson相關(guān)性分析。 結(jié)果： 1．HE染色結(jié)果正常發(fā)育組大腦視皮層的神經(jīng)元分布呈層狀，從皮質(zhì)淺層至深層依次分為分子層、外顆粒層、外錐體細(xì)胞層、內(nèi)顆粒層、內(nèi)錐體細(xì)胞層和多形細(xì)胞層，各層神經(jīng)元排列整齊。單眼剝奪組大鼠視皮層未見明顯異常。 2．發(fā)

4、育不同時限大鼠視皮層突觸素的表達光鏡下可見突觸素的陽性反應(yīng)產(chǎn)物呈棕黃色點狀或顆粒狀，主要位于神經(jīng)元之間，神經(jīng)元胞體、血管、胼胝體不被標(biāo)記。在視皮層各層均可見突觸素陽性顆粒。比較發(fā)育不同時限的正常組突觸素IOD值，可以看出在正常發(fā)育組突觸素的表達隨年齡呈發(fā)育性變化，P14時其IOD值為13.31±1.08，P21有明顯升高，達到26.52±1.88，以后三個時段之間沒有明顯差異，持續(xù)在較高水平。單眼剝奪組突觸素表達產(chǎn)物減少，表現(xiàn)為密度減低

5、及數(shù)量減少。其IOD值在P21為16.89±2.00(t=10.755,P<0.05)，在P28為17.16±0.79(t=12.219，P<0.05)，在P45為17.00±0.92(t=18.255， P<0.05)。 3．發(fā)育不同時限大鼠視皮層PSD-95的表達光鏡下可見，PSD-95陽性反應(yīng)產(chǎn)物呈棕色，主要分布在神經(jīng)元胞體和樹突、軸突。視皮層各層均可見表達產(chǎn)物，分子層表達較少。在正常發(fā)育組PSD-95的表達隨年齡呈發(fā)育性

6、變化，P14時其IOD值為5.48±1.03，P21有明顯升高，達到12.47±2.06，在P28為10.54±1.72，在P45為11.65±1.55。此三個時段之間沒有顯著差異，持續(xù)在較高水平。PSD-95表達產(chǎn)物在單眼剝奪組減少，密度降低。在P21其IOD值為4.94±0.57(t=6.503，P<0.05)，在P28為5.20±0.47(t=7.637，P<0.05)，在P45為4.87±0.72(t=12.895，P<0.05

7、)。 4．突觸素和PSD-95蛋白表達相關(guān)性分別對正常發(fā)育組及單眼剝奪組大鼠視皮層突觸素和PSD-95兩種蛋白的IOD值進行相關(guān)性分析。正常發(fā)育組的突觸素和PSD-95蛋白的IOD值成正相關(guān)(r=0.756，P<0.05)，單眼剝奪組中突觸素和PSD-95蛋白表達的IOD值成正相關(guān)(r=0.786，P<0.05)。 結(jié)論： 突觸素和PSD-95的表達均在P14-P21天迅速升高，正常大鼠視覺發(fā)育關(guān)鍵期為P14-P