肝硬化病人GLUT4和PP1基因表達(dá)的研究.pdf

1、目的:肝硬化病人60％-80%可發(fā)生糖耐量異常,而10%~20%可最終發(fā)展為糖尿病(diabetes mellitus,GM)。早在1906年就有人提出肝源性GM的概念.肝源性GM指繼發(fā)于慢性肝病或肝硬化的糖尿病。其相關(guān)的糖代謝異常發(fā)生機(jī)制尚未完全闡明,目前普遍認(rèn)為胰島素抵抗可能是其最主要的原因。胰島素抵抗即指肝臟、骨骼肌、脂肪等組織對(duì)胰島素作用的敏感性下降,胰島素效應(yīng)細(xì)胞對(duì)胰島素的反應(yīng)減弱,也就是說(shuō)需要超常量的胰島素才能引起正常反應(yīng)的

2、一種狀態(tài)。胰島素必須與細(xì)胞膜上的胰島素受體結(jié)合才能啟動(dòng)胰島素一系列的信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng),最終調(diào)節(jié)肌細(xì)胞、脂肪細(xì)胞和肝細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝取,并通過(guò)抑制糖異生,增加葡萄糖利用和糖原合成,以降低血糖。在胰島素的信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)中,葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-4(glucose transporter-4,GLUT-4)起著關(guān)鍵的作用。GLUT-4是最重要的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,承擔(dān)著全身50-80%的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)量,僅表達(dá)于胰島素敏感的肌肉細(xì)胞(主要是骨骼肌)和脂肪細(xì)胞,平

3、時(shí)主要在細(xì)胞內(nèi),在胰島素的刺激下,GLUT-4迅速轉(zhuǎn)位到細(xì)胞膜表面參與葡萄糖的轉(zhuǎn)運(yùn),在葡萄糖的吸收和利用上起了關(guān)鍵限速作用,這一過(guò)程發(fā)生障礙則引起胰島素抵抗和高血糖癥。GLUT-4將葡萄糖從細(xì)胞外轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞內(nèi)后,主要通過(guò)1型蛋白磷酸酶(glycogen-bound protein phosphatase1,PP1)將葡萄糖轉(zhuǎn)化成糖原貯存起來(lái)。PP1是胰島素激活糖合成酶途徑中的主要磷酸酶,在調(diào)節(jié)糖原合成以及葡萄糖的非氧化代謝途徑中起關(guān)鍵作

4、用,它由催化亞單位(37KDa)和調(diào)節(jié)亞單位(170 KDa),目前的研究主要集中在對(duì)調(diào)節(jié)它單位的研究上,而對(duì)其催化亞單位的研究很少。本實(shí)驗(yàn)的目的是研究肝硬化病人是否存在胰島素抵抗,以及GLUT4和PP1的蛋白和mRNA含量是否存在異常,以期找到肝硬化病人胰島素抵抗的病因,為臨床上更好的治療和干預(yù)肝硬化時(shí)的胰島素抵抗提供理論基礎(chǔ)。
　　方法:隨機(jī)選取正常組25例和肝硬化組(乙肝肝硬化需脾切)24例。
　　①兩組均在麻醉前取血

5、6ml,用快速血糖儀測(cè)定空腹血糖,然后將血靜置30min后,3000rpm,快速離心10min,取其上層血清于一E.P.管中,置于-80℃冰箱中,并用化學(xué)發(fā)光免疫分析法測(cè)定空腹胰島素和C肽。
　?、趦山M均進(jìn)腹時(shí)取骨骼肌一小塊,并切成50-100mg數(shù)塊,用液氮速凍后置于-80℃超低溫冰箱中,用western blot測(cè)定GLUT4,PPlgl的含量,并用RT-PCR測(cè)定它們的表達(dá)量。
　　結(jié)果:肝硬化組的空腹血糖,胰島素,C