腸組織一氧化氮、一氧化氮合酶及腸細胞凋亡在新生大鼠壞死性小腸結(jié)腸炎腸損傷中動態(tài)變化.pdf

1、目的:建立新生SD大鼠壞死性小腸結(jié)腸炎(NEC)模型，動態(tài)觀察新生大鼠NEC發(fā)病過程中腸細胞凋亡率和腸組織一氧化氮(NO)含量、一氧化氮合酶(NOS)活性變化及其與腸損傷關(guān)系，為闡明NEC發(fā)病機制、尋找有效治療藥物提供實驗依據(jù)。 方法 :SD新生大鼠出生48小時開始給予鼠配方奶人工喂養(yǎng)，100％氮氣缺氧90秒，4℃冷刺激10分鐘，每天2次，連續(xù)3天，建立新生SD大鼠NEC模型。40只新生SD大鼠隨機分成模型組(M)32只，對照組

2、(C)8只。模型組開始缺氧冷刺激后24小時(M24)、48小時(M48)、72小時(造模結(jié)束，M72)及最后一次缺氧+冷刺激后24小時(M96)空腹分別斷頭處死8只，實驗結(jié)束時處死對照組大鼠，留取腸管進行電鏡觀察及腸細胞凋亡率檢測(流式細胞儀)。40只新生SD大鼠，按上述分組和實驗方法，采用化學(xué)比色法檢測腸組織NO含量和NOS活性。所有新生鼠均取回盲部近端腸管進行病理學(xué)檢查及腸損傷評分。采用SPSS11.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行統(tǒng)計分析，α=0

3、.05為顯著性檢驗標(biāo)準(zhǔn)。 結(jié)果:[1]開始造模后，模型組相繼出現(xiàn)腹瀉、腹脹、萎靡、活動減少，生長減慢；透射電鏡示腸黏膜出現(xiàn)大量凋亡細胞，有些形成凋亡小體。[2]對照組腸組織損傷評分和腸細胞凋亡率(％)分別為0.08±0.15、4.8±2.9；M24、M48、M72和M96腸組織損傷評分分別為1.38±0.42、1.46±0.69、1.58±0.30和3.33±0.59，腸組織細胞凋亡率分別為12.8±6.3、14.9±5.5、1

4、7.7±5.5和27.6±9.9。腸損傷程度與腸組織細胞凋亡率含量呈顯著正相關(guān)(r凋亡率=0.853，p<0.01)。[3]M24、M48、M72、M96及對照組腸組織NO含量(mol／gprot)分別為0.94±0.44、2.07±0.38、2.88±0.32、3.09±0.40和3.98±1.15，腸組織tNOS活性(U/mgprot)為1.49±0.25、2.21±0.42、2.77±0.58、2.95±0.32和3.80±1.0

5、8，iNOS活性(U/mgprot)為0.55±0.23、1.25±0.27、1.94±0.46、2.06±0.18和2.86±1.07。腸組織NO、tNOS、iNOS含量與相應(yīng)平均腸組織損傷程度均呈顯著正相關(guān)關(guān)系(r分別為0.865、0.743、0.807，P均<0.05)。 結(jié)論:在鼠配方奶喂養(yǎng)+反復(fù)缺氧冷刺激后，腸細胞凋亡率明顯增加，腸組織NO含量和tNOS活性，特別iNOS活性明顯升高；隨時間延長，腸細胞凋亡增加、腸組織