泛素與細(xì)胞周期蛋白B1在卵巢上皮性腫瘤組織中的表達(dá)及其臨床意義.pdf

1、背景和目的：
　　卵巢上皮性惡性腫瘤是女性生殖系統(tǒng)常見三大惡性腫瘤之一,早期常無特異性臨床癥狀,患者就診時(shí)已多屬晚期,死亡率居?jì)D科惡性腫瘤首位,5年生存率徘徊在30％~40％。CA125是唯一確認(rèn)診斷的輔助敏感指標(biāo),且80％的上皮性卵巢癌患者血清中可檢測到CA125水平升高,但其水平高低在臨床上僅用于監(jiān)測卵巢癌患者治療中的病情緩解及惡化情況,目前仍缺乏相對(duì)較特異的生物學(xué)標(biāo)記物用于其早期診斷及預(yù)后判斷。
　　因此,尋找有關(guān)卵巢

2、癌早期診斷、病情監(jiān)測、預(yù)后判斷的新指標(biāo),提高卵巢癌患者生存率,是目前卵巢癌研究中至關(guān)重要的課題。泛素(Ubiquitin,Ub)及其依賴的非溶酶體途徑在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中起著重要的作用,它是存在于所有真核組織細(xì)胞中的高度保守的多肽,以自由分子或泛素結(jié)合蛋白(或蛋白泛素化)的形式存在。泛素廣泛分布在各種組織,是參與異常蛋白翻譯后修飾的一種組分,其主要作用是參與蛋白質(zhì)的降解。
　　在有功能的泛素鏈接酶系統(tǒng)-特異性ATP依賴性酶的催

3、化下,各種細(xì)胞蛋白被泛素化修飾,進(jìn)而在溶酶體和非溶酶體兩大系統(tǒng)參與下,泛素化的細(xì)胞蛋白被降解。若泛素-蛋白酶體途徑發(fā)生障礙,將影響細(xì)胞周期調(diào)控,除了加強(qiáng)一些癌基因的作用外,還可以使一些抑癌基因的作用減弱,進(jìn)而促使腫瘤發(fā)生。因此,細(xì)胞蛋白的泛素修飾對(duì)于許多細(xì)胞活動(dòng)過程是至關(guān)重要的,包括細(xì)胞內(nèi)蛋白的選擇性降解和細(xì)胞對(duì)各種有害刺激的應(yīng)激反應(yīng)及對(duì)細(xì)胞損傷的保護(hù)反應(yīng)。
　　然而,Ub在卵巢癌中是否存在異常表達(dá),其表達(dá)的改變能否影響卵巢癌的發(fā)

4、生、發(fā)展及預(yù)后尚不十分清楚。腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和惡變與細(xì)胞周期的失控密切相關(guān)。細(xì)胞周期蛋白B1(CyclinB1)是一個(gè)經(jīng)典的分裂周期蛋白,參與細(xì)胞周期檢查點(diǎn)調(diào)控,促進(jìn)G2/M期轉(zhuǎn)換而加速細(xì)胞周期進(jìn)程。
　　迄今為止,哺乳動(dòng)物細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)B型細(xì)胞周期素有6個(gè)亞型,稱為CyclinB1~6,CyclinB1主要出現(xiàn)在S期并在此期開始表達(dá),在G2/M時(shí)達(dá)到峰值,然后迅速被泛素化降解(Ubation),其過表達(dá)使細(xì)胞周期G2/M轉(zhuǎn)換時(shí)間縮短

5、,從而導(dǎo)致細(xì)胞癌變。
　　本研究通過免疫組化SP法檢測Ub和CyclinB1蛋白在卵巢上皮性癌中的表達(dá)情況,探討其表達(dá)與卵巢上皮性癌臨床病理因素、預(yù)后的關(guān)系,為卵巢癌的臨床診斷、病情監(jiān)測、預(yù)后判斷和治療等方面提供科學(xué)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和理論依據(jù)。
　　材料和方法：
　　1.收集我院2004年1月~2007年12月婦科住院患者手術(shù)切除的卵巢上皮性腫瘤石蠟包埋組織標(biāo)本70例及正常卵巢組織標(biāo)本20例,所有標(biāo)本術(shù)前均未行放療、化療及其

6、他治療。其中卵巢上皮性惡性腫瘤組織標(biāo)本50例,包括漿液性囊腺癌36例、粘液性囊腺癌9例、子宮內(nèi)膜樣癌5例;卵巢良性腫瘤組織標(biāo)本20例,包括漿液性囊腺瘤16例、粘液性囊腺瘤4例。
　　2.采用免疫組化SP法檢測20例正常卵巢組織、20例上皮性良性卵巢腫瘤組織及50例上皮性卵巢癌組織中Ub和CyclinB1的表達(dá)情況,結(jié)合上皮性卵巢癌的組織學(xué)類型、病理分級(jí)、臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況進(jìn)行分析,并研究兩指標(biāo)間的相關(guān)性。
　　3.統(tǒng)計(jì)

7、學(xué)處理:采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,Ub和CyclinB1蛋白的表達(dá)及其與臨床病理學(xué)特征的關(guān)系采用x2檢驗(yàn),Fisher精確概率法,采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析二者的相關(guān)性。以α=0.05作為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　結(jié)果：
　　1.Ub蛋白在上皮性卵巢癌、良性卵巢腫瘤和正常卵巢組織中的陽性表達(dá)率分別為34％(17/50)、10％(2/20)、5％(1/20),CyclinB1的陽性表達(dá)率分別為42％(21/50)

8、、15％(3/20)、5％(1/20),兩者在卵巢癌中的陽性表達(dá)率均顯著高于正常卵巢組織和良性卵巢腫瘤,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　2.卵巢上皮性癌中,Ub的表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05);與組織學(xué)類型無明顯相關(guān)性(P>0.05)。Ⅲ、Ⅳ期卵巢癌組織中Ub蛋白陽性表達(dá)率顯著高于Ⅰ、Ⅱ期,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=4.529,P<0.05);G3級(jí)卵巢癌組織中Ub蛋白陽性表達(dá)率顯著高于G1、G2

9、級(jí),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=3.964,P<0.05);淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織中Ub蛋白陽性表達(dá)率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的組織,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=6.269,P<0.05)。
　　3.在卵巢上皮性癌組織中,CyclinB1的表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)、臨床分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05);與組織學(xué)類型無明顯相關(guān)性(P>0.05)。Ⅲ、Ⅳ期卵巢癌組織中CyclinB1蛋白陽性表達(dá)率顯著高于Ⅰ、Ⅱ期,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=5.520,P<

10、0.05);G3級(jí)卵巢癌組織中CyclinB1蛋白陽性表達(dá)率顯著高于G1、G2級(jí),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=4.217,P<0.05);淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織中CyclinB1蛋白陽性表達(dá)率顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的組織,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=6.226,P<0.05)。
　　4.卵巢癌組織中Ub和CyclinB1蛋白表達(dá)的相關(guān)性:50例卵巢癌組織中Ub蛋白和CyclinB1蛋白均為陽性表達(dá)者7例,均為陰性表達(dá)者19例,Ub蛋白陽性表達(dá)而Cy

11、clinB1蛋白陰性表達(dá)者為10例,Ub蛋白陰性表達(dá)而CyclinB1陽性表達(dá)者為14例,結(jié)果表明兩者的表達(dá)水平呈現(xiàn)高度的一致性,經(jīng)Spearman等級(jí)相關(guān)分析,相關(guān)系數(shù)r=0.301,P=0.033,表明Ub和CyclinB1蛋白在卵巢癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系。
　　結(jié)論：
　　1.從正常卵巢組織、良性卵巢上皮腫瘤組織到卵巢上皮性癌組織,Ub和CyclinB1蛋白的陽性表達(dá)率逐漸升高,且多表達(dá)在臨床分期較晚、組織學(xué)分級(jí)較