siRNA干擾MafA基因?qū)π∈笠葝uβ細(xì)胞增殖及胰島素基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的：（1）篩選干擾效果最佳的一對siRNA；（2）研究MafA對胰島β細(xì)胞增殖及胰島素基因表達(dá)的影響；（3）探討MafA與FoxO1相互之間的關(guān)系。
　　方法：（1）實(shí)時熒光定量PCR（Real Time PCR）和蛋白免疫印跡（Western Blot）法分別檢測siRNA干擾片段轉(zhuǎn)染MIN6細(xì)胞后對MafA mRNA和蛋白的表達(dá)情況；（2）MTT法檢測MIN6細(xì)胞在不同糖濃度培養(yǎng)下siRNA處理前后MIN6細(xì)胞的增殖情況；（

2、3）Real Time PCR法檢測MIN6細(xì)胞在不同糖濃度培養(yǎng)下siRNA處理前后MIN6細(xì)胞內(nèi)FoxO1、PDX-1、insulin1和insulin2 mRNA的表達(dá)；（4）Western Blot法檢測MIN6細(xì)胞在不同糖濃度培養(yǎng)下siRNA處理前后MIN6細(xì)胞內(nèi)MafA、FoxO1、PDX-1蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果：（1）siMafA-2組與Cy3組相比，MafA mRNA和MafA蛋白表達(dá)均顯著下降（P﹤0.05），說

3、明siMafA-2組的s iRNA干擾效果最好。（2）不同糖濃度實(shí)驗(yàn)各亞組與對照組比較，MIN6細(xì)胞增殖均顯著降低（P﹤0.05）。（3）25mmol/L糖濃度下實(shí)驗(yàn)組與對照組比較，F(xiàn)oxO1 mRNA表達(dá)顯著降低（P﹤0.05）。（4）25mmol/L糖濃度下實(shí)驗(yàn)組與對照組比較，MafA、FoxO1和PDX-1蛋白表達(dá)均顯著下降（P﹤0.05）；2.5 mmol/L糖濃度下實(shí)驗(yàn)組與對照組比較，F(xiàn)oxO1和 PDX-1蛋白表達(dá)均顯著增加

4、（P﹤0.05），而MafA蛋白表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹥0.05）。（5）25mmol/L糖濃度下實(shí)驗(yàn)組與對照組比較，insulin2 mRNA表達(dá)顯著降低(P﹤0.05）；2.5mmol/L糖濃度下，insulin2 mRNA表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹥0.05）；不同糖濃度實(shí)驗(yàn)各亞組與對照組比較，insulin1 mRNA表達(dá)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P﹥0.05）。
　　結(jié)論：（1）siRNA-2組的siRNA使MafA基因和蛋白