RNA干擾和洛拉曲克對大腸癌LoVo細(xì)胞胸苷酸合成酶表達(dá)及細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、背景與目的:大腸癌是我國常見的惡性腫瘤之一，近年來該病發(fā)病率有增高的趨勢，其中手術(shù)切除仍然是治療大腸癌最有效的方法?；熥鳛槭中g(shù)后的輔助治療同樣發(fā)揮著重要的作用，但是在化療過程中產(chǎn)生的對化療藥的耐藥性成為腫瘤治療的難題。洛拉曲克是一種新型胸苷酸合酶(Thymidylatesynthase，TS)抑制劑，脂溶性且不含谷氨酸側(cè)鏈，有利于細(xì)胞攝取，從而提高腫瘤細(xì)胞的洛拉曲克的濃度。其進(jìn)入細(xì)胞后，可以干擾DNA的合成，阻止細(xì)胞分裂增殖而發(fā)揮抗腫

2、瘤作用。目前，洛拉曲克作為新型抗腫瘤化學(xué)合成藥在臨床試驗(yàn)中已證實(shí)其對肝癌、頭頸癌等實(shí)體癌有較好的療效。研究表明，應(yīng)用針對TS的化療藥時，TS的表達(dá)水平和化療的療效直接相關(guān)。RNA干擾(RNAi)技術(shù)是最有效的在轉(zhuǎn)錄后水平抑制基因表達(dá)的手段，而大腸癌的發(fā)生亦是癌基因的激活和失活共同作用的結(jié)果。研究還表明，腫瘤組織細(xì)胞中TS表達(dá)水平越高，化療效果越差。本文的目的旨在探索洛拉曲克、化學(xué)合成的siRNA以及二者聯(lián)合體外實(shí)驗(yàn)作用于LoVo細(xì)胞后對

3、TS表達(dá)水平的動態(tài)變化，以及對細(xì)胞增殖的影響。從而為臨床更好的提高化療藥的療效提供理論基礎(chǔ)。
　　 方法:靶向人胸苷酸合酶TS基因的siPAN轉(zhuǎn)染至人LoVo細(xì)胞中，利用RT-PCR和WesternBlot技術(shù)觀察沉默TS基因后對其基因和蛋白表達(dá)的變化。洛拉曲克體外作用于LoVo細(xì)胞，WesternBlot觀察對其TS水平動態(tài)變化，MTT實(shí)驗(yàn)及流式細(xì)胞技術(shù)觀察其對細(xì)胞增殖的影響。另聯(lián)合siRNA與洛拉曲克共同作用于LoVo細(xì)胞，

4、觀察其對細(xì)胞TS蛋白及細(xì)胞生長的影響。應(yīng)用SPSS18.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示;兩組間比較用t檢驗(yàn)，多組間比較用單因素方差分析。
　　 結(jié)果:
　　 1.洛拉曲克對LoVo細(xì)胞有明顯的抑制作用，其IC50值約為6.31μmol/L。其可以促進(jìn)細(xì)胞凋亡，凋亡率隨作用時間的延長而增加。
　　 2.相同劑量洛拉曲克處理細(xì)胞后，RT-PCR結(jié)果顯示，在mRNA水平，隨著時間的延長，

5、TS/GAPDH比值與對照組相比，有持續(xù)升高的趨勢，但是只有48h和60h相對于未處理組有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　 3.相同劑量的洛拉曲克處理細(xì)胞后，隨著時間的延長，其TS蛋白的表達(dá)水平亦有持續(xù)升高的趨勢。
　　 4.TSsiRNA可以顯著的下調(diào)LoVo細(xì)胞中TSmRNA及蛋白的表達(dá)水平，并抑制細(xì)胞生長。
　　 5.TSsiRNA聯(lián)合洛拉曲克作用于細(xì)胞相比于單獨(dú)作用組，可使IC50明顯降低，并且更明顯的促進(jìn)了細(xì)胞的凋亡