胚胎胰腺移植治療糖尿病的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、胚胎胰腺組織移植具有組織來(lái)源廣、免疫原性低及生長(zhǎng)潛力大等優(yōu)點(diǎn)，可為糖尿病的治愈提供一種新的解決方案。本文旨在研究小鼠早期胚胎胰腺組織分離技術(shù)的基礎(chǔ)上，利用C57BL/6 小鼠進(jìn)行同種同源胚胎胰腺組織移植，觀察其對(duì)糖尿病治療作用，并對(duì)適于胚胎胰腺移植的胚胎發(fā)生期進(jìn)行初步研究。 目的：（1）研究小鼠胚胎胰腺組織的內(nèi)分泌功能和發(fā)育過(guò)程；(2)研究小鼠胚胎胰腺移植治療糖尿病的作用及確定適于移植治療糖尿病的胚胎發(fā)生期。 方法：(1

2、) HE 染色、免疫組織化學(xué)染色和免疫熒光染色方法鑒定分離的E14.5、E16.5 胚胎胰腺。體外葡萄糖刺激胚胎胰腺胰島素分泌，ELISA 方法測(cè)定胰島素水平。(2)建立小鼠糖尿病模型，隨機(jī)分為移植組(TX組)和假手術(shù)組(SO組)。分離、移植E14.5、E16.5 胚胎胰腺。觀察移植受體血糖和體重變化；受體血糖降至正常水平后(≤11.2mmol/L)，腹腔注射葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)、胰島素耐量實(shí)驗(yàn)觀察受體對(duì)高糖的耐受及胰島素敏感性變化。獲取胚胎

3、胰腺移植物，觀察受體血糖和體重變化。測(cè)量獲取移植物的大小和重量；HE 染色、免疫組織化學(xué)染色和免疫熒光染色方法進(jìn)行移植物組織學(xué)鑒定；葡萄糖刺激胚胎胰腺移植物胰島素分泌，ELISA 方法測(cè)定胰島素水平。 結(jié)果：（1）組織學(xué)染色方法確認(rèn)獲得組織是胚胎胰腺。ELISA方法測(cè)定結(jié)果示: E14.5胚胎胰腺胰島素分泌量低；E16.5胚胎胰腺胰島素水平高（3.3mmol/L糖和16.7mmol/L高糖刺激胰島素分泌量分別為：1.6±1.4n

4、g/ml和4.1±1.9ng/ml）；與E14.5胚胎胰腺比較，有顯著性差異(P＜0.05)。（2）E14.5和E16.5胚胎胰腺組織移植后，受體體重均顯著增加；E14.5TX組和E16.5TX組受體血糖降至正常水平所需要的時(shí)間分別為：39.3±20.8天和27.6±9.9天；兩者比較，無(wú)顯著性差異(P=0.14)。獲取移植物后7天，受體血糖升至22.5±6.2 mmol/L，體重顯著降低；與獲取前血糖和體重相比，有顯著性差異(P＜0

5、.05)。SO組受體體重逐漸降低，血糖持續(xù)高于25mmol/L；獲取移植物前后，受體體重和血糖與獲取前比較，無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。IPGTT實(shí)驗(yàn)示E14.5、E16.5TX組受體對(duì)葡萄糖刺激反應(yīng)曲線相一致，t=30分鐘都達(dá)到血糖最高值(＞29.0mmol/L)，t=120分鐘血糖降至正常水平；SO組t=30分鐘也達(dá)到血糖最高值(32.8±0.4mmol/L)，然而血糖變化幅度較小(P＞0.05)。IPITT實(shí)驗(yàn)示E14.5和E1

6、6.5TX組受體對(duì)胰島素刺激反應(yīng)曲線相一致，t=30分鐘血糖降至最低值，90分鐘恢復(fù)至胰島素刺激實(shí)驗(yàn)前血糖水平；而SO組延遲至60分鐘降至最低值(17.6±11.6 mmol/L)。獲取移植物，E14.5和E16.5胚胎胰腺移植物的大小和體重?zé)o顯著統(tǒng)差異(P＞0.05)。E14.5及E16.5胚胎胰腺移植物免疫組織學(xué)染色顯示，移植后胚胎胰腺組織中有胰島形成，胰島素和胰高血糖素表達(dá)強(qiáng)度顯著強(qiáng)于移植前胚胎胰腺組織；胰島周?chē)写罅康闹究张荩?/p>

7、無(wú)外分泌組織發(fā)育。ELISA結(jié)果顯示胚胎胰腺移植物較移植前胚胎胰腺的胰島素分泌量顯著增加；E14.5、E16.5胚胎胰腺組織移植物的胰島素分泌量無(wú)顯著性差異(3.3mmol/L糖刺激：1.26±0.05 ng/ml vs 4.15±1.7ng/ml，P＞0.05；16.7mmol/L糖刺激：7.15±0.7ng/ml vs 7.46±3.0 ng/ml，P＞0.05)。 結(jié)論：(1)內(nèi)分泌功能鑒定證實(shí)：E14.5 胚胎胰腺已有少