核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB活性變化對膠質(zhì)瘤藥物治療作用影響的實驗研究.pdf

1、第一部分 NF-κBp65、EGFR、PCNA蛋白在人腦膠質(zhì)瘤中的表達及其相關(guān)性研究 目的:研究核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB亞基p65蛋白、表皮生長因子受體及增殖細胞核抗原在人腦膠質(zhì)瘤中的表達,探討NF-κB、EGFR及PCNA蛋白表達與膠質(zhì)瘤病理級別之間的關(guān)系以及NF-κB、EGFR及PCNA之間的相關(guān)性.方法:實驗組56例人腦膠質(zhì)瘤按病理級別分為Ⅰ-Ⅱ級組、Ⅲ級組和Ⅳ級組,8例取自腦外傷減壓術(shù)中的腦組織作為對照組.應(yīng)用免疫組化方法對實驗組及

2、對照組標(biāo)本中NF-κB亞基p65、EGFR、PCNA蛋白進行檢測.第二部分 NF-κB、IκB活性變化對TNF-α誘導(dǎo)人膠質(zhì)瘤細胞U251凋亡作用的影響 目的:研究TNF-α對人腦膠質(zhì)瘤細胞株U251的生長抑制作用、誘導(dǎo)凋亡作用及對NF-κB、IκB活性的影響,同時研究NF-κB抑制劑PDTC對TNF-α誘導(dǎo)的細胞凋亡及NF-κB、IκB活性變化的影響,探討抑制NF-κB活性在膠質(zhì)瘤生物治療中的作用.方法:用不同濃度的TNF-α或TNF

3、-α+PDTC作用于人膠質(zhì)瘤細胞株U251,觀察U251細胞生長的情況并繪制生長曲線,用MTT法檢測其對U251細胞生長的抑制率;用流式細胞儀檢測其對U251細胞的誘導(dǎo)凋亡作用;用相同劑量的TNF-α(20ng/ml)或TNF-α(20ng/ml)+PDTC(10μmol/L)以不同的時間(5、10、30、60、120min)作用于U251細胞,用免疫組織化學(xué)方法檢測U251細胞中p65蛋白表達的變化,用Western blot檢測Iκ

4、Bα蛋白表達水平的變化.第三部分 順鉑聯(lián)合NF-κB抑止劑PDTC對裸鼠U251皮下移植瘤治療作用的實驗研究 目的:研究順鉑聯(lián)合NF-κB抑制劑PDTC對裸鼠U251移植瘤細胞的誘導(dǎo)凋亡作用及對細胞周期的影響,觀察在治療過程中NF-κB亞基p65蛋白及IκBαmRNA表達的變化.探討抑制NF-κB的活性對膠質(zhì)瘤化療的影響.結(jié)論:CDDP能抑制裸鼠U251移植瘤生長、促進細胞凋亡.使細胞周期阻滯于G<,0>/G<,1>期,抑制細胞增殖.C