白細(xì)胞介素基因變異與冠心病MACE發(fā)生風(fēng)險的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、研究背景:
　　冠狀動脈性心臟病(冠心病，coronary artery disease，CAD)是21世紀(jì)威脅人類健康的主要疾病之一。CAD的主要不良心血管事件(Major adverse cardiac events，MACEs)包括不穩(wěn)定性心絞痛、心肌梗塞、腦卒中和因心臟病而死亡等，是直接和/或間接導(dǎo)致冠心病死亡的主要原因[1]，其中近1/4的死亡是可以避免的[2]。2010年世界衛(wèi)生組織全球非傳染性疾病現(xiàn)狀報告顯示:200

2、8年全球死于心血管疾病的人數(shù)為1700萬，其中730萬死于冠心病。在美國，盡管CAD患病率呈下降趨勢，但每年因?yàn)镃AD死亡的人數(shù)仍達(dá)到25萬人以上。冠心病是一個慢性進(jìn)展性無菌性炎癥性疾病:炎癥反應(yīng)貫穿于斑塊形成的起始及進(jìn)展階段、心肌梗死及心梗后心肌重構(gòu)的過程中。2002年發(fā)布的美國國家膽固醇教育計劃NECP-ATPⅢ(NCEP2002)，將冠心病患者發(fā)病時男性＜55歲、女性＜65歲定義為早發(fā)冠心病(Premature Coronary

3、Artery Disease PCAD)，而早發(fā)冠心病在全部冠心病人群中占四分之一。
　　針對相關(guān)炎癥因子，如IL-9、IL-10、IL-11以及IL-12在冠心病發(fā)生發(fā)展中的作用，特別是與不良心血管事件(MACE，major adverse cardiac event)預(yù)后的關(guān)聯(lián)，國內(nèi)外鮮有研究。通過分析冠心病患者炎癥因子的基因多態(tài)性與患者預(yù)后的相關(guān)，可為進(jìn)一步研究該炎癥因子在心血管疾病中的作用提供依據(jù)，并為篩選冠心病患者高危人

4、群以及評價預(yù)后提供遺傳學(xué)依據(jù)。據(jù)此，我們選擇與CAD患者預(yù)后可能發(fā)揮重要作用的白介素相關(guān)基因(IL9:rs31563 C＞T,IL9:rs31564 G＞T,IL10: rs1800872 T＞G,IL12A: rs2243115T＞G，IL12B: rs3212227 T＞G)等位點(diǎn)變異，運(yùn)用大樣本的人群流行病學(xué)預(yù)后設(shè)計，結(jié)合環(huán)境危險因素的采集，分析基因-環(huán)境/基因-基因交互作用與CAD患者預(yù)后的關(guān)系。
　　研究目的:
　

5、　1、分析IL-9、IL-10、IL-1、IL-12A、IL-12B相關(guān)基因SNPs與早發(fā)及晚發(fā)冠心病不良心血管事件的關(guān)聯(lián);
　　2、對陽性關(guān)聯(lián)的SNP位點(diǎn)，構(gòu)建熒光素酶報告基因，探討多態(tài)性改變所帶來的功能學(xué)意義，進(jìn)而提示該SNP在冠心病發(fā)生不良預(yù)后過程中的生物學(xué)意義。
　　研究方法:
　　選取于東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院心內(nèi)科住院患者754名。每位患者均經(jīng)冠脈造影診斷為冠心病。對患者進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查、收集體格檢查資料、生化

6、檢查結(jié)果以及采集血樣提取DNA，檢測研究對象（六個位點(diǎn)）多態(tài)性。設(shè)定主要心血管不良事件進(jìn)行定期隨訪。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果以及隨訪資料，建立數(shù)據(jù)庫，選用頻數(shù)分布、中位數(shù)等描述性分析、Kaplan-Meier檢驗(yàn)、多因素Cox回歸等統(tǒng)計學(xué)方法對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。
　　研究結(jié)果:
　　1、早發(fā)冠心病患者中女性的比例較晚發(fā)冠心病患者為多(P＜0.001)。在體質(zhì)指數(shù)(BMI)，吸煙情況，是否合并糖尿病，是否合并高血壓以及冠心病的分類上，早發(fā)和晚

7、發(fā)并無明顯的區(qū)別(P＞0.05).晚發(fā)冠心病患者的血管的損傷性改變比早發(fā)冠心病患者為多(P=0.001)。53(39.8％)例早發(fā)冠心病患者在造影中證實(shí)左前降支存在病變，較晚發(fā)冠心病患者為多(P=0.041)。另外，早發(fā)冠心病患者中血漿總膽固醇水平甘油三酯水平較晚發(fā)人群為低，但在高密度脂蛋白、低密度脂蛋白以及超敏C反應(yīng)蛋白的水平上，兩組人群無顯著差異(P值分別為0.201，0.129，0.365)。
　　2、在入選的711例患者中

8、，基因分型成功率達(dá)到94.79％至100％。反復(fù)分析一致率為100％。此次研究中納入的患者的次要等位基因頻率(Minor allele frequency，MAF)同表二中中國總體人群的SNPs的MAF相似。
　　3、在單個位點(diǎn)分析中，早發(fā)冠心病患者IL12B rs3212227 T＞G的基因型與晚發(fā)患者差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.340)。晚發(fā)冠心病患者生存分析提示MACE的差別在ILI2Brs3212227 TT, TG和GG基

9、因型的攜帶者中差異有統(tǒng)計學(xué)意義(log-rank test，P=0.010)，同樣的結(jié)果在TT/TG vs GG中也可見(log-rank test, P=0.046)。在對年齡、性別、體質(zhì)指數(shù)(BMI)、吸煙情況、是否合并糖尿病和高血壓病進(jìn)行校準(zhǔn)后，多變量COX比例風(fēng)險回歸分析也同樣顯示了攜帶IL12B rs3212227 GG增加晚發(fā)冠心病患者M(jìn)ACE的風(fēng)險(GG vs TT/TG: adjusted HR=1.33，95％ CI=

10、1.00-1.76, P=0.048),在其他SNPs位點(diǎn)中，包括IL9 rs31563 C＞T, IL9 rs31564 G＞T, IL10 rs1800872 T＞G和IL12Ars2243115 T＞G在內(nèi)的基因多態(tài)性并未見與早法及晚發(fā)患者M(jìn)ACE發(fā)生風(fēng)險存在聯(lián)系。
　　4、Kaplan-Meier風(fēng)險評估顯示，同單支病變相比較，早發(fā)冠心病患者若存在三支病變情況，其MACE發(fā)生的風(fēng)險比較晚發(fā)冠心病患者為高(Log rank

11、P=0.032 adjusted HR=2.26，95％ CI=1.14-4.47 for pCAD; Log rank P＜0.001, adjusted HR=1.57,95％ CI=1.19-2.06 formature CAD)。在冠心病臨床分型方面，同其他類型相比較，晚發(fā)冠心病患者中急性ST段抬高型心肌梗死的MACE發(fā)生率增加了105％(adjusted HR=2.05，95％ CI=1.49-2.81)，而急性非ST段抬高型

12、心肌梗死MACE在晚發(fā)人群中的發(fā)生率增加了56％(adjustedHR=1.56，95％ CI=1.18-2.06)，但相似的結(jié)果在早發(fā)冠心病患者未見。
　　5、對于包括所選擇的人口特征、臨床指標(biāo)以及五個SNPs位點(diǎn)以及MACE風(fēng)險比在內(nèi)的19個變量使用單變量和多變量的COX比例風(fēng)險回歸分析模型，分析和評估這些變量的內(nèi)在關(guān)系。對于早發(fā)冠心病患者，四個變量被納入到多變量的模型中，結(jié)果顯示早發(fā)冠心病患者如若合并高水平CRP，糖尿病以及

13、攜帶IL9 rs31564 GT/TT，IL10 rs1800872 TT基因型，其MACE發(fā)生風(fēng)險比較高，而高齡的非冠心病患者如若攜帶IL12B rs3212227 GG基因型，高水平的CRP和糖尿病，其MACE發(fā)生風(fēng)險比較高。
　　6、生成了IL12B3'UTR熒光素酶報告質(zhì)粒(rs3212227 G和T等位基因)，并且使用pRL-SV40質(zhì)粒使轉(zhuǎn)染標(biāo)準(zhǔn)化?？梢杂^測到當(dāng)在293T共同轉(zhuǎn)染化學(xué)合成的IL12B3'UTR熒光素酶報

14、告質(zhì)粒（rs3212227 G和T等位基因）后，基因rs3212227 G等位基因較T等位基因熒光素酶表達(dá)水平顯著降低(P＜0.001)。就此，可以推測IL12B3'UTR基因多態(tài)性參與調(diào)控IL12B的表達(dá)。
　　研究結(jié)論:
　　1、攜帶IL9 rs31564 GT/TT，IL10 rs1800872 TT基因型的早發(fā)冠心病患者其發(fā)生MACE的風(fēng)險顯著增高，而晚發(fā)冠心病患者如若合并高水平的CRP、合并糖尿病、攜帶IL12Br

15、s3212227 GG基因型，其MACE的風(fēng)險顯著增高，報告基因檢測顯示IL12B3'UTR基因多態(tài)性參與調(diào)控IL12B的表達(dá)。
　　2、COX比例風(fēng)險分析顯示了rs3212227T＞G基因變異合并高齡、糖尿病、高CRP水平與晚發(fā)冠心病患者M(jìn)ACE風(fēng)險增加有關(guān)。本次研究中另外四個SNPs在早發(fā)和晚發(fā)冠心病患者中并未與MACE風(fēng)險增加存在顯著關(guān)聯(lián)。
　　3、在本次研究中，COX回歸分析也顯示了無論是早發(fā)冠心病還是晚發(fā)冠心病人群