牛羊白細(xì)胞介素-18基因的克隆和表達(dá).pdf

1、 牛羊白細(xì)胞介素18及其受體在家畜養(yǎng)殖業(yè)中是一種具有廣闊應(yīng)用前景的新型免疫佐劑和免疫治療劑，在比較免疫學(xué)研究上也具有一定意義。 本研究根據(jù)已發(fā)表的IL-18成熟蛋白cDNA序列保守區(qū)設(shè)計(jì)一對特異性引物，應(yīng)用RTPCR技術(shù)從山羊肺泡巨噬細(xì)胞和LPS/ConA活化的脾細(xì)胞中擴(kuò)增到編碼山羊IL-18成熟蛋白基因，其大小為480bp。將該基因克隆到pMD18-T載體中，經(jīng)序列測定表明山羊IL-18與奶牛和綿羊的IL-1

2、8基因序列高度同源，而且Caspase-1酶切位點(diǎn)的氨基酸序列沒有發(fā)生變異，決定IL-18活性的兩個(gè)關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)也沒有發(fā)生變異；文章以羊痘病毒作為模板，設(shè)計(jì)一對特異性引物，經(jīng)PCR擴(kuò)增了gIL-18BP基因，將該基因克隆到表達(dá)載體pET32a(+)中，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)，在大腸桿菌BL21(DE3)中實(shí)現(xiàn)了融合表達(dá)。目的蛋白以包涵體形式存在。表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)過變性、復(fù)性和層析純化后，具有體外抑制羊IL-18刺激MDBK細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ的活性。