半胱天冬氨酸蛋白酶抑制劑對胰島細胞的保護.pdf

1、目的：
　　 探索半胱天冬氨酸蛋白酶抑制劑在胰島分離、純化及培養(yǎng)過程中對胰島細胞的保護作用。
　　 方法：
　　 實驗分為實驗組及對照組,每組各用新生豬5只,實驗組在胰島分離純化過程中加入caspase抑制劑(Z-VAD-FMK,濃度為20um/d1)進行處理后收集胰島,于第2、4、6天換液培養(yǎng),每次換液培養(yǎng)基內(nèi)加入(Z-VAD-FMK,濃度為20um/d1),對照組不加caspase抑制劑Z-VAD-FMK處理

2、,同樣條件下分離純化及培養(yǎng),兩組細胞培養(yǎng)至第7天分別進行以下檢測:應(yīng)用caspase-3活性檢測試劑盒對胰島凋亡的效應(yīng)酶caspase-3活性進行檢測；應(yīng)用RT-PCR檢測bcl-2及p53基因表達情況；流式細胞儀檢測胰島凋亡率；通過葡萄糖靜態(tài)反應(yīng)培養(yǎng)方法進行胰島素釋放試驗。
　　 結(jié)果：
　　 通過對Caspase3活性的檢測,結(jié)果顯示,實驗組Caspase3活性穩(wěn)定在低水平,而對照組Caspase3的活性明顯升高(P

3、<0.001)；RT-PCR檢測bcl-2和P53基因,結(jié)果表明實驗組較對照組bcl-2表達增強,而p53表達減弱；應(yīng)用流式細胞儀檢測胰島細胞凋亡率,實驗組細胞凋亡率較對照組明顯降低(P<0.001)；通過葡萄糖刺激胰島素釋放實驗,對胰島分泌功能的檢測,得出結(jié)果,實驗組與對照組胰島分泌功能無明顯差異。
　　 結(jié)論：
　　 半光天冬氨酸蛋白酶抑制劑(Z-VAD-FMK:濃度為20um/d1)對體外培養(yǎng)的胰島細胞具有顯著抗凋