188Re標記U87-EGFRvⅢ細胞的適配子在膠質瘤動物模型中的作用.pdf

1、南方醫(yī)科大學2010級碩士學位論文188Re標記U87。EGFRvlII細I胞的適配子在膠質瘤動物模型中的作用Theeffectsof188RelabelledaptamersofU87EGFRvlllcellsingliomaanimalmodel課題來源：國家自然科學基金項目(30973481，81272509)學位申請人指導教師專業(yè)名稱培養(yǎng)類型培養(yǎng)層次所在學院伍錫棟張興梅副教授神經生物學學術型碩士研究生基礎醫(yī)學院2013年4月18

2、目廣州中文摘要EGFRVIII在正常細胞中不表達，僅存在于惡性的腫瘤細胞，在正常組織中不表達，因而是一個很好的腫瘤治療靶標，用CellSELEX技術篩選針對過表達U87EGFRvIII細胞的適配子對膠質瘤靶向治療研究有重要意義，而且使用的Cell—SELEX技術具有簡便、快速、經濟等特點。適配子具有分子小、快速的血漿清除率、高組織穿透力、免疫原性低、穩(wěn)定性好等特點，文獻報道適配子可有效地應用于靶向治療、檢測和診斷等。2005年第一個適配

3、子的藥物“Mucagen”已經被美國FDA批準上市，另外針對核仁蛋白的ASl411等適配予也在臨床試驗中，這些都表明適配子在疾病治療中作用。隨著SELEX技術的進展，它已經成為了生命科學研究和醫(yī)藥研究中越來越重要的研究工具，兇此應用CellSELEX技術對膠質瘤細胞的靶標篩選和研究劉膠質瘤的臨床診斷、治療及腫瘤基礎研究具有很大的應用價值和前景，通過篩選得到的特異性適配子也將成為基礎研究和應用研究中有效的分子識別工具。本實驗研究主要從三方

4、面研究：一是在細胞水平上篩選針對U87一EGFRvIII細胞的適配子及其結合特異性鑒定；二是在裸鼠動物荷瘤模型上初步觀察篩選得到的適配子U2對腫瘤生長的抑制作用；三是188Re標記適配子在體內的代謝情況和靶向性治療研究。(1)通過應用Cell—SELEX技術針對靶細胞U87EGFRvHI篩選適配子。在第4輪開始引入反篩細胞U87MG，應用消減SELEX技術篩選適配子。在篩選適配子過程中嚴格地按照一定的比例投入文庫的量，在每一次投入的次文

5、庫都要經過尿素膠鑒定。在洗滌細胞時隨著篩選輪數(shù)的不斷增加，洗滌時問和洗滌次數(shù)也逐漸的增加，文庫與細胞的孵育時間也逐漸的減少。我們利用PCR技術擴增雙鏈dsDNA，通過鏈霉親和素磁珠分離法分離單鏈ssDNA，得到帶FITC的單鏈ssDNA作為下次篩選的文庫。PCR過程中需要對反應體系和各種試劑的反應量進行梯度摸索，最后確定為條帶單一、純度高、分子量為76bp的為目的條帶，結果表明PCR擴增得到的雙鏈dsDNA和磁珠分離法得到的單鏈ssDN