地塞米松干預(yù)宮內(nèi)感染致新生鼠腦白質(zhì)損傷TNF-a及Nogo-A的表達(dá)變化.pdf

1、目的：通過(guò)研究推測(cè)宮內(nèi)感染致新生鼠腦白質(zhì)損傷與腫瘤壞死因子-a(TumorNecrosis Factor-a，TNF-a)及神經(jīng)軸突生長(zhǎng)抑制因子-A(Neurite outgrowth inhibitor-A,Nogo-A)有關(guān);地塞米松（Dexamethasone，Dex）可能通過(guò)減少腦組織TNF-a、Nogo-A表達(dá)，對(duì)宮內(nèi)感染致新生鼠腦白質(zhì)損傷有保護(hù)作用。
　　方法：⑴建立動(dòng)物模型及實(shí)驗(yàn)分組:將36只Sprague-Dawl

2、ey(SD)雌性大鼠，12只SD雄性大鼠適應(yīng)環(huán)境1周后，以3∶1比例合籠，每日清晨觀察母鼠陰道，以發(fā)現(xiàn)陰道陰栓之日記為受孕第1日，未發(fā)現(xiàn)陰栓的雌性大鼠做陰道拭子的圖片，鏡下的發(fā)現(xiàn)精子即記為受孕。選取30只確定受孕的SD雌鼠隨機(jī)分為，生理鹽水(Normal saline,NS)組， LPS組，Dex組，每組10只。NS組在SD母鼠孕第15、16天腹腔內(nèi)注射生理鹽水0.35mg/kg.d，連續(xù)2天，LPS組在SD母鼠孕第15、16天腹腔內(nèi)注

3、射LPS，0.35mg/kg.d，連續(xù)2天。Dex組在SD母鼠孕第15、16天腹腔注射LPS，0.35mg/kg.d，注射LPS后1小時(shí)，相同方法注射Dex，0.5mg/kg.d，連續(xù)2天。⑵采集標(biāo)本:除去孕22天前，娩出的早產(chǎn)鼠，足月新生鼠娩出后，分別于生后4個(gè)時(shí)間點(diǎn)(6h，12h，24h，48h)斷頭處死，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)8只，斷頭處死后迅速取腦組織于10％福爾馬林溶液中固定12h，然后進(jìn)行常規(guī)脫水、石蠟包埋，應(yīng)用蘇木素-伊紅(hemat

4、oxylin eosin，HE)染色觀察各組各時(shí)間點(diǎn)新生鼠腦組織病理形態(tài)及組織結(jié)構(gòu)的變化。在新生鼠娩出后，夾起脫落的胎盤(pán)，蒸餾水沖洗后固定于10％福爾馬林溶液，12h后進(jìn)行常規(guī)脫水、石蠟包埋。隨機(jī)選取NS組，LPS組及Dex組的母鼠，每組2只，斷頭處死后取其子宮，10％福爾馬林溶液中固定12小時(shí)后，然后進(jìn)行常規(guī)脫水、石蠟包埋，HE染色觀察各組母鼠子宮、胎盤(pán)病理形態(tài)及組織結(jié)構(gòu)的變化，及鏡下中性粒細(xì)胞的數(shù)量。⑶觀察指標(biāo):采用S-P(Stre

5、ptavidin-Perosidase，S-P)法免疫組化染色檢測(cè)各組新生鼠生后6h、12h、24h、48h，腦組織TNF-a及Nogo-A的表達(dá)。
　　結(jié)果：①子宮、胎盤(pán)HE染色病理學(xué)變化:各組子宮壁HE染色鏡下均可見(jiàn)代表已孕的滋養(yǎng)細(xì)胞。NS組:子宮壁、胎盤(pán)輪廓清晰，細(xì)胞排列整齊，鏡下偶見(jiàn)中性粒細(xì)胞;LPS組:子宮壁、胎盤(pán)充血水腫，輪廓不清晰，血管壁增厚，管腔不規(guī)則，可見(jiàn)大量反應(yīng)性的中性粒細(xì)胞浸潤(rùn);Dex組:子宮壁、胎盤(pán)輪廓尚清

6、晰，可見(jiàn)少量反應(yīng)性中性粒細(xì)胞。②腦組織HE染色病理學(xué)變化:NS組:腦組織結(jié)構(gòu)未見(jiàn)明顯改變，輪廓清晰;神經(jīng)細(xì)胞排列整齊，細(xì)胞膜完整，細(xì)胞核染色均勻，神經(jīng)細(xì)胞間質(zhì)無(wú)異常，各時(shí)間點(diǎn)變化無(wú)明顯差異。LPS組:腦組織水腫、疏松、稀化;神經(jīng)細(xì)胞膜不完整可見(jiàn)凹陷改變，細(xì)胞核染色不均勻，細(xì)胞核基質(zhì)破壞可見(jiàn)核碎裂及固縮，神經(jīng)細(xì)胞間質(zhì)水腫。Dex組:腦組織可見(jiàn)輕度水腫，未見(jiàn)組織明顯稀疏，染色尚清晰;神經(jīng)細(xì)胞胞膜較完整，偶可見(jiàn)缺損，細(xì)胞核可見(jiàn)少許碎裂，但無(wú)核

7、固縮變化，神經(jīng)細(xì)胞間質(zhì)部分可見(jiàn)輕度水腫，各時(shí)間變化現(xiàn)相近，變化無(wú)明顯差異。③TNF-a表達(dá):NS組組內(nèi)各個(gè)時(shí)間點(diǎn)TNF-a表達(dá)的比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。LPS組新生鼠腦組織TNF-a表達(dá)生后6h迅速上升，12h表達(dá)達(dá)到高峰，高峰后維持在較高水平，組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。Dex組新生鼠腦組織TNF-a表達(dá)相同時(shí)間點(diǎn)高于NS組，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。三組相同時(shí)間點(diǎn)，LPS組TNF-a表達(dá)明顯高于NS組(P＜0.

8、01)、Dex組(P＜0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，NS組和Dex組TNF-a比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。④Nogo-A表達(dá):NS組Nogo-A表達(dá)呈弱陽(yáng)性，組內(nèi)各個(gè)時(shí)點(diǎn)Nogo-A表達(dá)比較，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。LPS組新生鼠腦組織Nogo-A表達(dá)于生后6h開(kāi)始升高，12h升高迅速且達(dá)到高峰，24h仍處于高值但稍有下降，48小時(shí)明顯下降，組內(nèi)6h(P＜0.01)，24h(P＜0.01)，48h(P＜0.01)的No

9、go-A表達(dá)與12h比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Dex組Nogo-A表達(dá)較弱，組內(nèi)各時(shí)間點(diǎn)比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。LPS組和NS組在6h，12h，24h時(shí)間點(diǎn)上，LPS組Nogo-A表達(dá)高于NS組(P＜0.01)，48h兩者比較(P＜0.05)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。Dex組和LPS組Nogo-A的表達(dá)，48h兩組的表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，其余時(shí)間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。Dex組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)Nogo-A表達(dá)高于N

10、S組(P＞0.05)，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：⑴LPS腹腔注射后，母鼠子宮壁、胎盤(pán)HE染色可見(jiàn)充血、水腫及大量中性粒細(xì)胞，且LPS組新生鼠腦組織稀疏，結(jié)構(gòu)模糊，神經(jīng)細(xì)胞胞膜破裂，細(xì)胞核染色不均變淡，神經(jīng)細(xì)胞間質(zhì)水腫。LPS可致宮內(nèi)感染，宮內(nèi)感染可致新生鼠腦白質(zhì)損傷。⑵LPS組新生鼠腦組織的TNF-a表達(dá)，生后6h開(kāi)始上升，12h表達(dá)達(dá)到高峰，高峰后持續(xù)在較高水平。而且LPS組TNF-a表達(dá)明顯高于NS組(P＜0.01)，推測(cè)宮內(nèi)

11、感染腦白質(zhì)損傷可能與細(xì)胞因子TNF-a有關(guān)聯(lián)。⑶LPS組新生鼠腦組織Nogo-A表達(dá)于生后6h開(kāi)始升高，12h升高迅速且達(dá)到高峰，24h仍處于高值但稍有下降，48小時(shí)明顯下降。新生鼠腦組織Nogo-A表達(dá)LPS組與NS組比較各個(gè)時(shí)間點(diǎn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。推測(cè)Nogo-A與宮內(nèi)感染腦白質(zhì)損傷有關(guān)，在腦白質(zhì)損傷過(guò)程中可能發(fā)揮一定作用。⑷宮內(nèi)感染母鼠給予Dex干預(yù)后，母鼠子宮壁、胎盤(pán)可見(jiàn)少量中性粒細(xì)胞，未見(jiàn)明顯充血、水腫，新生鼠腦組織鏡下水腫